流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度...

外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其...

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉(zhuǎn)移準備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達譜，整合素α6β4和...

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體，主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等，存在于血液、唾液、尿液等多種...

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用...

外泌體的提取、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。...

ELISA與WB的原理一樣，在抗體包被的微孔板中加入待測樣品、封閉、一抗孵育，洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值，結(jié)尾用標準曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現(xiàn)對外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方...

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主...

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度...

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定，對診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn)。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問題，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產(chǎn)物，通過外泌體遞送...

外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種R...

細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于...

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌...

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體，通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成，其大小均一，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細胞、淋巴細胞和肉瘤細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)...

細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于...

外泌體（Exosomes）是細胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs），其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及...

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性，變性后，通過SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中?？?..

ELISA與WB的原理一樣，在抗體包被的微孔板中加入待測樣品、封閉、一抗孵育，洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值，結(jié)尾用標準曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現(xiàn)對外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方...

外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種R...

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為腫細胞的轉(zhuǎn)移準備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的腫細胞細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的腫細胞細胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的腫細胞細胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達譜，整合素α...

外泌體的相關(guān)成分：1、外泌體的膜同細胞一樣，是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上...

根據(jù)內(nèi)侵量的不同，可以產(chǎn)生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解。降解產(chǎn)物可被細胞回收利用。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過...

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定，對診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn)。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問題，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產(chǎn)物，通過外泌體遞送...

根據(jù)內(nèi)侵量的不同，可以產(chǎn)生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解。降解產(chǎn)物可被細胞回收利用。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過...

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定，對診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn)。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問題，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產(chǎn)物，通過外泌體遞送...

密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層，目前普遍應用的是蔗糖，這種方法可以成功地將亞細胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體和核內(nèi)體）分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部，當施加離心力時，樣品中的顆粒以...

根據(jù)內(nèi)侵量的不同，可以產(chǎn)生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解。降解產(chǎn)物可被細胞回收利用。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過...

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白...

胞外囊泡和外泌體的異質(zhì)性。細胞外囊泡的兩大類是胞外體和外泌體。胞外體通過質(zhì)膜出芽釋放，大小在50~1mm之間。外泌體起源于內(nèi)泌體途徑，通過形成包含ILVs的ESEs、LSEs，較終形成多泡體。當MVBs與質(zhì)膜融合時，外泌體釋放(尺寸范圍~40~160nm)。外...

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主...