外泌體用于細胞學或動物實驗前的無菌處理 已經經過上述方法制備的外泌體在進行細胞或動物實驗之前還需進行一步除菌過濾，這個時候考慮到得率，應該采用離心法處理，以減少過濾時的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對樣品進行澄清[目錄號SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜] 用PBS平衡Amicon? Ultra-15 超濾管(目錄號UFC901024,10 kDa MWCO) ，4000g離心 X 10 min。 從超濾...

特別推薦應用（提供實驗報告作為參考） Microcon?超濾管： Microcon?PCR 級超濾管： ? 法醫(yī)鑒定分析的DNA樣品制備 ? 生物大分子樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換 ? 體外合成mRNA的純化 ? 以人mRNA或總RNA制備熒光DNA探針 ? 游離標記物的去除 ? 納克級核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究 ? 替代乙醇沉淀，離心法高效濃縮基因組DNA 應用指南 典型應用 肽及生長因子濃縮 蛋白濃縮與脫鹽 電泳等操作前的蛋白樣品濃縮 HPLC前去除蛋白 組織培養(yǎng)抽提物和細胞裂解液中大分子成分的純化 生物樣本濃縮（抗原，抗體，酶等） 從含有SD...

樣品的澄清、過濾和除菌 Ultrafree?-MC和Ultrafree?-CL微濾管 Ultrafree?-MC（0.5mL）和Ultrafree?-CL（2mL）是一次性使用的微濾離心管，可以用于各種水性樣品和在某些溶劑中的樣品除顆粒物、除沉淀的處理。提供兩種體積及多種膜孔徑以及已經經過無菌處理的產品供選擇。Ultrafree?微濾離心管操作簡便、樣品回收率高且重復性很好，是蛋白和核酸樣品處理的理想選擇。 特點與優(yōu)點 有0.1-5.0μm五種膜孔徑供選擇 采用高回收率的親水Durapore? (PVDF)膜和親水PTFE膜 提供無菌包裝和非無菌包裝形式產品 過濾速度快，數據穩(wěn)定...

Amicon? Ultra 4 mL 超濾管 -離心速度快而保持很高的回收率 4 種不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon? Ultra 4mL 超濾管中濃縮（3kDa 細胞色素 C， 10kDa 細胞色素 C，30kDa BSA，100kDa IgG）， 測定在離心一定時間后的回收率。數據顯 示所有樣品在離心 15 分鐘左右回收率均 >95%。 為了方便初次使用者選擇**合適的超 濾管產品，默克密理博生命科學部網 站上提供選擇指引，您需要按照提 示進行選擇，**終會選出一款產品。 為每次實驗選擇**合適的， 您也能快速成為超濾高手！超濾濃縮管具體報價多少呢。虹口區(qū)...

這種小管適合在1.5mL離心機中使用，其Ultracel?超濾膜對于蛋白及其它成分都表現出 極低的非特異性結合，連同醫(yī)藥級O型圈封閉設計，確保更少的樣品丟失，更穩(wěn)定的數據結果。諸多考慮周到的精細設計使Microcon?成為比較好用的樣品制備工具之一。 特點與優(yōu)點： 低吸附膜和反轉回收設計，即使是小體積、低濃度樣品得率也能達到95%以上 可以用產品自帶的1.5mL樣品收集管存儲濾過液和濃縮產物 濃縮倍數可達100X 操作簡便快捷，易于標準化。 Microcon? DNA Fast Flow 超濾管 專門設計用于從含有SDS的溶液中濃縮和回收基因組DNA。管子和膜均為低非特異性吸附...

特別推薦應用（提供實驗報告作為參考） Microcon?超濾管： Microcon?PCR 級超濾管： ? 法醫(yī)鑒定分析的DNA樣品制備 ? 生物大分子樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換 ? 體外合成mRNA的純化 ? 以人mRNA或總RNA制備熒光DNA探針 ? 游離標記物的去除 ? 納克級核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究 ? 替代乙醇沉淀，離心法高效濃縮基因組DNA 應用指南 典型應用 肽及生長因子濃縮 蛋白濃縮與脫鹽 電泳等操作前的蛋白樣品濃縮 HPLC前去除蛋白 組織培養(yǎng)抽提物和細胞裂解液中大分子成分的純化 生物樣本濃縮（抗原，抗體，酶等） 從含有SD...

用超濾對分子進行分級 通過選定截留分子量的超濾操作能精確地將混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切實際。事實上，膜的規(guī)格描述是基于截留而非通過 的性質。一項實驗中，采用 100k NMWL 濾膜，大于 100kDa 的分子截 留率 >90%，但這時比膜孔徑小的分子并不是完全自由地通過濾膜， 75kDa 的分子截留率為 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留?；旌系? 溶液中的各 種成分通過膜并不像單一成分的溶液那么簡單和容易。實 踐中，如果要分離兩種大分子，它們之間的分子量差異應該達到 10 倍 以上，或至少膜的 NMWL 規(guī)格在兩種蛋白之間，則可達到比較理想的 分離...

蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的**終濃度不超過 20mg/ml。對于對濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，建議的改進方法是： 1）離心力降為推薦離心力的30%-50% 2）改用截留分子量更大的超濾管（如原本選用10k，此時可以選擇30k） 3）在濃縮過程中取出超濾管，用***頭反復吹吸幾次后再繼續(xù)濃縮 Amicon? Ultra超濾膜中含有微量甘油。如果出現這種情況，請先用0.1 N NaOH清洗再離心。***用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應立即使用，如暫時不用，請保持潤濕狀態(tài)，避免重新干燥。一個好的超濾濃縮管代理銷售需要具備哪些...

無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據樣品的粘稠程度，以及需要制備的目標外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(yōu)化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便達到更好的得率和操作體驗。 樣品體積大于 30mL 時可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管，請注意攪拌式超濾杯在200mL 以內時吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進一步提高特定外泌體的純度，可選用包被相應抗體的磁珠進行親...

7次低速離心，總耗時~100分鐘（含60分鐘孵育時間） 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂（50%懸濁液）和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h，其間可溫和攪動促進結合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結合雜質。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液，1,000×g離心1 min。 5. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管（可選用50k MWCO型號）。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。4,000×g離心5 min。 7. 加入2...

加入漂洗緩沖液（體積是樹脂柱床體積的7.5倍）并離心。< 500μL樹脂時1,000×g離心1 min；≥ 500μL樹脂時2,000×g離心4 min。 4. 使用一個新的50 mL離心管作為收集管。 5. 加入洗脫緩沖液（體積是樹脂柱床體積的5倍）與樹脂混勻并離心。< 500μL樹脂時1,000×g離心1 min；≥ 500μL樹脂時2,000×g離心4 min?；厥展苤屑醇兓玫牡鞍?。 6. 如果是純化抗體，在純化產物中加入中和緩沖液。 * 進行較大體積操作時，可以延長結合反應時間，并用膠帶密封上樣池上沿以便顛倒混勻操作。離心前去除膠帶即可。選購不帶Amicon? Ultra 0...

通量（超濾效率）及其影響因素 超濾過程中需要在速率和回收率之間平衡以期獲得比較好的效果。濾膜的 通量的定義是流量除以面積，使用高 NMWL 濾膜可以增加通量，但同時 會降低回收率。選擇膜和裝置時需要同時考慮截留分子量和通量。而參 與影響通量的因素很多，包括： 壓力：較為稀釋的蛋白溶液或膠體懸液進行超濾時，流量隨著跨膜壓力 （TMP）的增大而增加。正壓條件下操作，如 Stirred Cell 攪拌式超濾杯， 這種因素影響較為明顯。如果極化影響***，通量會達到一個平臺，甚 至可能隨著壓力的增加而降低。超濾濃縮管的主要優(yōu)勢是什么。奉賢區(qū)默克4ml超濾濃縮管提供的超濾管是沒有經過去內...

用于攪拌式超濾杯的Ultracel?預切超濾膜片 Ultracel? 再生纖維素膜可以用來對較為稀釋的溶液進行脫鹽或濃縮。Ultracel? 膜是親水性的，微觀結構緊密，確保對蛋白、核酸等大分子吸附比較低而回收率比較高。 *膜的常規(guī)截留分子量分為1, 3, 5, 10, 30及 100 kDa等。 *膜片直徑分為25, 44.5, 47, 63.5, 76, 90及150 mm。 對于大體積、高濃度（如蛋白濃度大于 1.0 mg/mL）的樣品進行脫鹽和濃縮，Biomax?聚苯醚砜（PES）超濾膜是很好的選擇。血清、血漿或條件組織培養(yǎng)基等，都是 Biomax?超濾膜適合處理的樣品。 *...

對于慢***推薦Amicon? Ultra 100kDa; 對于腺***推薦Amicon? Ultra 50kDa。具體的操作步驟可以參考***濃縮純化試劑盒FTLV00003和FTAV00003的產品使用說明書。另提供AAV（腺相關***）的制備方法供參考。 去污劑因其獨特的性質，當濃度大于臨界微團濃度（Critical Micelle Concentration, CMC）時，去污劑分子會聚集形成微團而改變分子構象，這有可能會影響去污劑的去除效果。 Amicon? Ultra超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析，可用緩沖液或Milli-Q?水預清洗。如果干擾仍然存在，用0.1 N N...

Centrifree?過濾器 Centrifree? 過濾器擁有研究及體外診斷證書（美國適用），是為臨床研究實驗室的樣品制備而設計的，能夠快速、高效地通過超濾去除小體積（0.15–1.0 mL）血清、血漿等生物樣品中的蛋白未結合的小分子溶質。數分鐘之內完成精確的分離，樣品終體積約為 10μL；不會發(fā)生樣品稀釋、pH 值變化、離子成分變化或未結合小分子溶質濃縮等情況。這種產品使用的是低吸附的再生纖維素膜，親水膜和 O 型圈，不含增塑劑，確保獲得較好的樣品回收效果。 優(yōu)點與應用： 分離血清、血漿等生物學樣品中未 吸附的小分子物質 精確的藥物結合實驗樣品制備使用 去除生物樣品中的蛋白質等...

雖然影響因素較多，我們通常建議截留分子量約為目的分子分子量一半的膜，這樣可以比較大化樣品的回收，同時節(jié)省過濾時間。截留微濾中膜的孔徑大小通常以微米計，表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據NMWL分級，有時也用截留分子量（MWCO）。NMWL表示大多數大于這個值的分子將在超濾時截留。一個確定NMWL的超濾膜應該截留至少90%以上的這個大小的球形分子。但為了保險起見，實踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時 膜截留分子量應該充分大于流過的溶質。當膜材料相同時，孔徑減小 會增加排阻而減小濾過率。截留及產物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設備構...

用超濾對分子進行分級 通過選定截留分子量的超濾操作能精確地將混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切實際。事實上，膜的規(guī)格描述是基于截留而非通過 的性質。一項實驗中，采用 100k NMWL 濾膜，大于 100kDa 的分子截 留率 >90%，但這時比膜孔徑小的分子并不是完全自由地通過濾膜， 75kDa 的分子截留率為 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留?；旌系? 溶液中的各 種成分通過膜并不像單一成分的溶液那么簡單和容易。實 踐中，如果要分離兩種大分子，它們之間的分子量差異應該達到 10 倍 以上，或至少膜的 NMWL 規(guī)格在兩種蛋白之間，則可達到比較理想的 分離...

離心方式的超濾方法進行溶液置換也被稱為“滲濾”，操作時樣品首先被濃縮，繼而加入新的溶液，再次濃縮時，原溶液已經被換成選定的溶液。 化學相容性與溶出 樣品的化學背景有時很多樣而復雜，過濾的過程中很重要的一點是操作過程不應給樣品帶來新的污染。所以濾膜和裝置與樣品接觸的其它部分都不能與樣品中的化學成分發(fā)生反應而產生溶出污染。關于默克密理博各種微濾、超濾產品的化學相容性請參考產品使用說明書或垂詢技術支持專線 ?；厥章始捌渲匾猿瑸V的**終目的常常是很大程度地回收目標溶質，但膜的很多特性會對這一目的產生影響。影響回收的因素包括：? 標稱分子量限制（NMWL）/ 核酸截留分子量（NCO）? 截留 ...

外泌體的精制磁珠法富集精制外泌體：300μg樣品（相當于300μg總蛋白）用含有5μg anti-CD63抗體的溶液稀釋，與protein A/G磁珠共孵育1hr，漂洗后用0.2M glycine洗脫。如果要先將抗體偶聯在磁珠上（以避免抗體洗脫下來對外泌體的干擾），請參考默克磁珠操作說明書。（Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3)）。推薦使用試劑目錄號信息：cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已經建立了基于“微濾+超濾”的外泌體制備...

無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據樣品的粘稠程度，以及需要制備的目標外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(yōu)化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便達到更好的得率和操作體驗。 樣品體積大于 30mL 時可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管，請注意攪拌式超濾杯在200mL 以內時吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進一步提高特定外泌體的純度，可選用包被相應抗體的磁珠進行親...

多臺同時操作模式 借助Amicon?超濾杯多臺操作連接裝置可以同時運行多達3個超濾杯。 Amicon? stirred cells 耐溶劑型攪拌式超濾杯 用于對在有機溶劑中的樣品進行濃縮和緩沖液置換。有 47mm 和 76mm 兩種規(guī)格。需要注意醛、酮（如**）、醚酯等會降低碳氟化合物材質 O 形圈的使用壽命。 特點與優(yōu)點： 采用圓柱形硼硅酸鹽玻璃容器和 PTFE 超好化學兼容性超濾膜 可預裝膜后進行高壓滅菌 直接從上面操作，避免拆卸裝置的麻煩 組件少，易于清潔和組裝 配套使用 47 或 76 mm 直徑預切膜片 應用： 帶有有機成分的樣品的濃縮、換液Millipore...

無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據樣品的粘稠程度，以及需要制備的目標外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(yōu)化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便達到更好的得率和操作體驗。 樣品體積大于 30mL 時可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管，請注意攪拌式超濾杯在200mL 以內時吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進一步提高特定外泌體的純度，可選用包被相應抗體的磁珠進行親...

Minicon?濃縮器 Minicon? 濃縮器用于在電泳或免疫電泳分析前對尿液和腦脊液進行濃縮，以增強對不正?；虿B(tài)的蛋白質（例如尿中的 Bence Jones 蛋白）的識別。B15型有 8 個濃縮單元，用于 5mL 樣本的處理；CS15型有 10 個濃縮單元，適合 2.5mL 樣品的處理。溶劑和鹽分通過超濾被吸收劑吸收而樣品被濃縮。 優(yōu)點與應用 靜態(tài)濃縮器，不需要其它輔助裝置 濃縮倍數達到 100 倍，樣品終體積小 同時濃縮多個臨床樣品 特別推薦用于尿液、腦脊液等的蛋白 富集分析超濾濃縮管的主要優(yōu)勢是什么。金山區(qū)默克2ml超濾濃縮管批發(fā)提供的超濾管是沒有經過去內***處理的，...

如果能確保用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作的話，那么有可能是這個目的蛋白的原因。有時蛋白會因其本身的一些特性（構象差異）而影響濃縮效果，建議選用上一分子量級別的超濾管（如原本選用30k，此時可以選擇10k）。 2）如果目的樣本也不在濾過液中，那么： a）蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL？ b）用來確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？ c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具體解決方法請參考上面的關于蛋白沉淀問題的解釋。超濾濃縮管的好處都有很多。奉賢區(qū)默克2ml超濾濃縮管聯系人高通量超濾 MultiScreen?超濾膜板 MultiScreen? 超濾膜板是實現高通量生物樣品處理的...

7次低速離心，總耗時~100分鐘（含60分鐘孵育時間） 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂（50%懸濁液）和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h，其間可溫和攪動促進結合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結合雜質。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液，1,000×g離心1 min。 5. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管（可選用50k MWCO型號）。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。4,000×g離心5 min。 7. 加入2...

雖然影響因素較多，我們通常建議截留分子量約為目的分子分子量一半的膜，這樣可以比較大化樣品的回收，同時節(jié)省過濾時間。截留微濾中膜的孔徑大小通常以微米計，表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據NMWL分級，有時也用截留分子量（MWCO）。NMWL表示大多數大于這個值的分子將在超濾時截留。一個確定NMWL的超濾膜應該截留至少90%以上的這個大小的球形分子。但為了保險起見，實踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時 膜截留分子量應該充分大于流過的溶質。當膜材料相同時，孔徑減小 會增加排阻而減小濾過率。截留及產物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設備構...

將裝有樣品的Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管接在Amicon?Pro上樣池的下端。 3. Amicon?Pro上樣池內加入預先準備好的1.5 mL含有染料的反應混合液。 4. 4,000×g離心15 min。 5. 優(yōu)化選做：將樣品在室溫下多孵育30 min。 6. 上樣池中加入1.5 mL PBS± NaN3。 7. 4,000×g離心15 min換液同時濃縮。 8. 倒轉Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管1,000×g離心回收標記好的抗體。 特點與優(yōu)點： 特別的反轉離心回收設計，滯留體積很小，樣品損失少， 樣品回收率通常>90% 濃縮倍數達到50-20...

雖然影響因素較多，我們通常建議截留分子量約為目的分子分子量一半的膜，這樣可以比較大化樣品的回收，同時節(jié)省過濾時間。截留微濾中膜的孔徑大小通常以微米計，表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據NMWL分級，有時也用截留分子量（MWCO）。NMWL表示大多數大于這個值的分子將在超濾時截留。一個確定NMWL的超濾膜應該截留至少90%以上的這個大小的球形分子。但為了保險起見，實踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時 膜截留分子量應該充分大于流過的溶質。當膜材料相同時，孔徑減小 會增加排阻而減小濾過率。截留及產物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設備構...

Amicon? Ultra 4 mL 超濾管 -離心速度快而保持很高的回收率 4 種不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon? Ultra 4mL 超濾管中濃縮（3kDa 細胞色素 C， 10kDa 細胞色素 C，30kDa BSA，100kDa IgG）， 測定在離心一定時間后的回收率。數據顯 示所有樣品在離心 15 分鐘左右回收率均 >95%。 為了方便初次使用者選擇**合適的超 濾管產品，默克密理博生命科學部網 站上提供選擇指引，您需要按照提 示進行選擇，**終會選出一款產品。 為每次實驗選擇**合適的， 您也能快速成為超濾高手！上海超濾濃縮管代理銷售哪家好？默...

Amicon? Ultra超濾管的膜材質為默克密理博特有的 Ultracel? 再生纖維素膜，生產工藝嚴格，截留分子量明確而精細，蛋白吸附損失基本上大概小。 如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個蛋白的大小需要相差多少？ 按照經驗，建議兩個蛋白的分子量要相差一個數量級（10倍）。 Amicon? Ultra與70%乙醇是兼容的，但是對滅菌處理的具體方法沒有做相關的測試，所以無法提供更進一步的參考信息。 Amicon? Ultra都是采用熱封設計，不可以用高壓高溫滅菌。 不保證超濾管不包含RNA酶，建議用0.1% DEPC在37度浸泡2小時，以完全滅活RNA酶；殘留的DEPC可以用...