廣州anti Flag免疫沉淀磁珠多少錢(qián)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-06-05
RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需要考慮多個(gè)方面,以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
1. 目標(biāo)蛋白的選擇:確定你想要研究的目標(biāo)RNA結(jié)合蛋白(RBP)。
2. 陽(yáng)性和陰性對(duì)照:設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí),需要包括陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)與裂解:選擇合適的細(xì)胞類型進(jìn)行培養(yǎng)。
4. 抗體孵育:將特異性抗體與細(xì)胞裂解液孵育,以形成抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。
5. 免疫沉淀:使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子進(jìn)行免疫沉淀,捕獲抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。
6. 洗滌和分離:洗滌珠子以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和RNA。從珠子上分離RNA,可能需要使用低pH緩沖液或蛋白酶K處理。
7. RNA分析:使用qPCR、Northern blot或RNA-Seq等方法分析沉淀下來(lái)的RNA。
8. 數(shù)據(jù)分析:對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行定量分析,比較不同樣品之間的RNA水平。

9. 實(shí)驗(yàn)重復(fù):為了確保結(jié)果的可靠性,實(shí)驗(yàn)應(yīng)該進(jìn)行至少三次重復(fù)。 免疫沉淀技術(shù)ChIP的優(yōu)缺點(diǎn)是什么?廣州anti Flag免疫沉淀磁珠多少錢(qián)

10. 技術(shù)驗(yàn)證:使用其他技術(shù)(如RNA-pull down或FISH)驗(yàn)證RIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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免疫共沉淀分析(Co-IP)與IP十分類似,基本的技術(shù)都是采用目標(biāo)抗原特異性的固相化抗體;但I(xiàn)P的目標(biāo)是純化單一抗原,而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。

在Co-IP實(shí)驗(yàn)中,已知抗原稱為誘餌蛋白,與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號(hào)分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等,蛋白間相互作用強(qiáng)度范圍可能介于高度瞬時(shí)和十分穩(wěn)定之間。
基本的Co-IP實(shí)驗(yàn)方案與IP相同,實(shí)際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是,還有許多其他因素需要考慮,例如,結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化,優(yōu)化時(shí),需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強(qiáng)度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。
廣州Co IP免疫沉淀磁珠多少錢(qián)免疫沉淀RIP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠?

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免疫沉淀ChIP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力,但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡(jiǎn)而言之,瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng),而磁珠在得率,可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。

    免疫沉淀(immunoprecipitation)是指利用抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性,將抗原(常為靶蛋白)從混合體系沉淀下來(lái),初步分離靶蛋白的一種方法。免疫共沉淀(coimmunoprecipitation)是一種在體外探測(cè)兩個(gè)蛋白分子間是否存在特異性相互作用的一種方法。其原理非常簡(jiǎn)單,如果兩個(gè)蛋白在體外體系能夠發(fā)生特異性相互作用的話,那么當(dāng)用一種蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀時(shí),另一個(gè)蛋白也會(huì)被同時(shí)沉淀下來(lái)。與酵母雙雜交技術(shù)不同,免疫共沉淀技術(shù)所利用的是抗原和抗體間的免疫反應(yīng),是一種基于體外非細(xì)胞的環(huán)境中研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用的方法。 免疫沉淀技術(shù)IP的應(yīng)用有哪些?

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免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力,但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡(jiǎn)而言之,瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng),而磁珠在得率,可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。
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免疫沉淀技術(shù)的綜述。廣州anti Flag免疫沉淀磁珠多少錢(qián)

免疫沉淀RIP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力,但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡(jiǎn)而言之,瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng),而磁珠在得率,可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。
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標(biāo)簽: 免疫沉淀 支原體