anti Flag免疫沉淀

來源: 發(fā)布時間:2024-06-15

Co-IP的實驗步驟:
1. 細胞裂解:首先,細胞或組織被裂解,釋放其中的蛋白質(zhì)。
2. 抗體結(jié)合:然后,將特異性抗體(針對已知蛋白質(zhì)之一的抗體)加入到裂解物中。這些抗體會特異性地結(jié)合到目標蛋白(誘餌蛋白)上。
3. 免疫復(fù)合物形成:抗體與目標蛋白結(jié)合后,形成免疫復(fù)合物。
4. 沉淀:接著,使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子(如瓊脂糖或磁性珠子)來捕獲免疫復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合,從而拉下抗體以及與之結(jié)合的目標蛋白和任何相關(guān)的相互作用蛋白。
5. 洗滌:捕獲的免疫復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。
6. 洗脫和分析:免疫復(fù)合物被洗脫并進行進一步的分析,如Western blot(WB)或質(zhì)譜分析,以鑒定相互作用的蛋白質(zhì)。
免疫沉淀技術(shù)Co-IP是什么?anti Flag免疫沉淀

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ChIP技術(shù)的應(yīng)用:
1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鑒定:研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。
2. 組蛋白修飾的分布:分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況,這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。
3. DNA甲基化研究:結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究DNA甲基化對基因表達的影響。
4. 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能:研究染色質(zhì)重塑對基因表達和細胞功能的影響。
5. 疾病相關(guān)基因的調(diào)控:研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化。
ChIP技術(shù)是表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要工具,它可以幫助科學(xué)家們理解基因表達是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。
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免疫共沉淀分析(Co-IP)實驗原理與IP十分類似,基本的技術(shù)都是采用目標抗原特異性的固相化抗體;但IP的目標是純化單一抗原,而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。

在Co-IP實驗中,已知抗原稱為誘餌蛋白,與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等,蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間?;镜腃o-IP實驗方案與IP相同,實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是,還有許多其他因素需要考慮,例如,結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化,優(yōu)化時,需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。

免疫共沉淀分析(Co-IP)與IP十分類似,基本的技術(shù)都是采用目標抗原特異性的固相化抗體;但IP的目標是純化單一抗原,而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。

在Co-IP實驗中,已知抗原稱為誘餌蛋白,與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等,蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間。
基本的Co-IP實驗方案與IP相同,實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是,還有許多其他因素需要考慮,例如,結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化,優(yōu)化時,需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。
免疫沉淀技術(shù)IP的應(yīng)用有哪些?

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免疫沉淀技術(shù)(Immunoprecipitation, IP)是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)特性的重要方法。它具有一些明顯的優(yōu)點,但也存在一些局限性。
優(yōu)點:
1. 特異性強:IP技術(shù)利用特異性抗體對目標蛋白進行捕獲,因此具有很高的特異性。
2. 富集低豐度蛋白:可以從小量樣本中富集低豐度的目標蛋白,有助于研究稀有蛋白。
3. 研究蛋白質(zhì)相互作用:通過Co-IP等變體技術(shù),可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。
4. 操作簡便:IP實驗步驟相對簡單,容易在實驗室中實施。

缺點:
1. 對抗體質(zhì)量依賴性高:需要高質(zhì)量的特異性抗體,否則可能導(dǎo)致假陽性或?qū)嶒炇 ?
2. 存在非特異性結(jié)合:樣本中的其他蛋白質(zhì)可能非特異性地結(jié)合到抗體或固相載體上。
3. 可能破壞蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象:裂解和洗滌步驟可能破壞蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu),影響其功能。
4. 可能存在背景噪聲:非特異性結(jié)合可能導(dǎo)致背景噪聲,影響結(jié)果的清晰度和解釋。

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免疫沉淀技術(shù)IP的實驗設(shè)計。anti Flag免疫沉淀

免疫沉淀技術(shù)(Immunoprecipitation, IP)的實驗設(shè)計通常包括以下幾個關(guān)鍵步驟:

1. 目標蛋白質(zhì)的選擇:
2. 抗體的選擇:選擇特異性強、親和力高的抗體來捕獲目標蛋白質(zhì)
3. 樣本的準備:收集和準備細胞或組織樣本。
4. 蛋白質(zhì)的裂解和釋放:選擇合適的裂解條件,如pH值、離子強度、去污劑等。
5. 蛋白質(zhì)濃度的測定:確定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度,以便于后續(xù)步驟的標準化。
6. 免疫沉淀的操作:將特異性抗體與裂解液混合,并在適宜的條件下孵育,以形成抗體-抗原復(fù)合物。
7. 非特異性結(jié)合的減少:通過預(yù)純化步驟去除可能的非特異性結(jié)合蛋白。
8. 洗滌:多次洗滌以去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)。
9. 目標蛋白質(zhì)的洗脫:使用適當?shù)木彌_液洗脫抗體-抗原復(fù)合物。
10. 后續(xù)分析:對洗脫的蛋白質(zhì)進行進一步分析,如Western Blot.
11. 對照實驗:設(shè)計適當?shù)恼龑φ蘸拓搶φ?,以評估實驗的特異性和敏感性。
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在CYTOCH的理念中,化學(xué)與生物的結(jié)合是提升產(chǎn)品性能的關(guān)鍵。化學(xué)技術(shù)的進步為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域提供了更多的可能性,使得相關(guān)實驗結(jié)果更為靈敏、準確。為了在細胞研究領(lǐng)域取得技術(shù)性突破,CYTOCH研發(fā)團隊不斷嘗試將新型的化學(xué)技術(shù)與生物技術(shù)相融合。CYTOCH在細胞領(lǐng)域所進行的已有技術(shù)的持續(xù)突破、新技術(shù)的創(chuàng)新研發(fā)、化學(xué)與生物技術(shù)的不斷碰撞結(jié)合,使得CYTOCH產(chǎn)品在臨床診斷、藥物研發(fā)和科研教育等領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用前景。

在保證研發(fā)驅(qū)動力的前提下,為確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定與可靠以及產(chǎn)品的使用性,CYTOCH對原料供應(yīng)商進行嚴格審計和把關(guān),選擇品質(zhì)優(yōu)良的原料進行后續(xù)產(chǎn)品生產(chǎn)。 在生產(chǎn)過程中,CYTOCH對生產(chǎn)人員資質(zhì)、生產(chǎn)環(huán)境、生產(chǎn)過程、生產(chǎn)物料進行嚴格把控。后續(xù)的產(chǎn)品質(zhì)檢、入庫出庫均嚴格按照企業(yè)內(nèi)控標準由質(zhì)量和倉庫物流人員進行層層把關(guān),確保每一批出廠產(chǎn)品質(zhì)量都處于行業(yè)前端水平。