廣州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)要多久

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2024-06-29

細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染了支原體，會(huì)有以下幾種影響：

1. 細(xì)胞生長(zhǎng)受影響：支原體污染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢，甚至停止生長(zhǎng)。細(xì)胞可能會(huì)變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。
2. 細(xì)胞形態(tài)變化：雖然某些細(xì)胞在支原體污染后形態(tài)變化不明顯，但有些細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)體積增大，細(xì)胞碎片增多，培養(yǎng)瓶中細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積等現(xiàn)象。
3. 代謝和功能改變：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的代謝和功能，例如培養(yǎng)液中的精氨酸被大量消耗，引起細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動(dòng)還可能引起培養(yǎng)液成分和pH值的變化。
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果受影響：使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因?yàn)橹гw會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，導(dǎo)致染色體畸變，細(xì)胞膜抗原性改變，細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低等。
5. 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：一株污染的細(xì)胞可能成為實(shí)驗(yàn)室的污染源，對(duì)工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進(jìn)而污染其他細(xì)胞，導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染。
6. 科研結(jié)果的重復(fù)性問(wèn)題：由于支原體污染，某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能能在支原體陽(yáng)性的細(xì)胞中得到，導(dǎo)致科研結(jié)果的重復(fù)性受到影響
支原體檢測(cè)的樣本用什么合適？廣州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)要多久

廣州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)要多久,支原體

在科研中，支原體檢測(cè)是確保細(xì)胞培養(yǎng)純凈性的重要環(huán)節(jié)。以下是一些在科研中常見的支原體檢測(cè)方法：
1. 支原體培養(yǎng)法：這是一種傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，通過(guò)將細(xì)胞培養(yǎng)物接種到特定的培養(yǎng)基中，觀察是否有支原體生長(zhǎng)。這是直接的檢測(cè)方法，但耗時(shí)較長(zhǎng)，通常需要數(shù)周時(shí)間。
2. DNA染色法：使用熒光染料（如Hoechst或DAPI）染色細(xì)胞核，然后通過(guò)熒光顯微鏡觀察。這種方法操作簡(jiǎn)便，可以快速得到結(jié)果，但特異性不高，可能會(huì)有假陽(yáng)性。
3. 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法：這是一種分子生物學(xué)技術(shù)，通過(guò)設(shè)計(jì)特異性的引物，擴(kuò)增支原體DNA，從而檢測(cè)支原體的存在。PCR法具有高靈敏度和特異性，已成為日常細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)的可靠方法。
4. 核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）：NAT技術(shù)通過(guò)擴(kuò)增并檢測(cè)特定的支原體基因組保守序列來(lái)進(jìn)行支原體污染檢測(cè)，具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。
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細(xì)胞庫(kù)支原體檢測(cè)的必要性主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：
1. 確保細(xì)胞庫(kù)的質(zhì)量與安全性：細(xì)胞庫(kù)的建立需要為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞。支原體檢測(cè)是確保細(xì)胞庫(kù)中細(xì)胞質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。
2. 符合監(jiān)管要求：支原體檢測(cè)是生物制品安全性監(jiān)管的一部分，全球范圍內(nèi)的藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中都有支原體檢測(cè)的相關(guān)說(shuō)明。
3. 避免對(duì)生物制品的影響：支原體污染可能會(huì)影響生物制品的安全性和有效性，因此需要通過(guò)檢測(cè)來(lái)避免這種風(fēng)險(xiǎn)。
4. 維護(hù)細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性：支原體是真核細(xì)胞和干細(xì)胞培養(yǎng)中最常見的問(wèn)題之一，它們可以改變細(xì)胞的代謝、減緩增殖速度，甚至引起染色體畸變。
5. 預(yù)防交叉污染：由于支原體可以通過(guò)氣溶膠和微粒污染實(shí)驗(yàn)室其他區(qū)域，支原體檢測(cè)有助于預(yù)防交叉污染的發(fā)生。
6. 保障數(shù)據(jù)的可靠性：支原體污染可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此定期進(jìn)行支原體檢測(cè)有助于保障研究數(shù)據(jù)的可靠性。
7. 常規(guī)監(jiān)測(cè)的重要性：支原體應(yīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，以確保細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量和安全。
8. 遵守藥典規(guī)定：根據(jù)中國(guó)藥典的規(guī)定，每8~12代細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)進(jìn)行支原體檢查，以符合規(guī)定。

細(xì)胞培養(yǎng)中，需要去除支原體的污染：支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中 普遍的問(wèn)題之一，細(xì)胞庫(kù)中或正在使用的細(xì)胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng) – 阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖 
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達(dá)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和形態(tài) 
04/ 損害膜和細(xì)胞器 
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 
06/ 時(shí)間、金錢和有價(jià)值的細(xì)胞丟失，耽誤研究時(shí)間
07/ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性 降低
08/ 生物安全問(wèn)題
為什么要去除支原體？

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支原體的預(yù)防可通過(guò)以下方式：
1. 控制污染源：通過(guò)定期檢測(cè)和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無(wú)支原體存在，從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2. 改善無(wú)菌操作技術(shù)：通過(guò)提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí)，避免在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中引入支原體污染。
3. 使用無(wú)菌設(shè)備和耗材：使用無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材，如無(wú)菌培養(yǎng)基、血清等，減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
4. 定期消毒和清潔：對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔，包括工作臺(tái)、培養(yǎng)箱等，以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑：使用專門針對(duì)支原體的預(yù)防性試劑，如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺(tái)噴霧、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等，以預(yù)防支原體污染。
6. 提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)：通過(guò)科普教育和培訓(xùn)，提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)和預(yù)防意識(shí)。
7. 建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程，包括樣本處理、廢物處理、設(shè)備維護(hù)等，以降低支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
支原體檢測(cè)方法qPCR法的應(yīng)用。廣州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)要多久

支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的方法？廣州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)要多久

qPCR法，即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（QuantitativePolymeraseChainReaction）法，在支原體檢測(cè)中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

1. 快速定性檢測(cè)：qPCR法可以快速檢測(cè)生產(chǎn)原料、細(xì)胞庫(kù)、病毒種子、病毒或細(xì)胞收獲液、治*用細(xì)胞中潛在的支原體污染。
2. 臨床樣本檢測(cè)：qPCR法可用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室樣本及臨床樣本中的支原體，具有快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。
3. 監(jiān)管要求：基于TaqMan的qPCR測(cè)定專門針對(duì)檢測(cè)細(xì)胞治*和復(fù)雜生物生產(chǎn)樣本中的支原體而開發(fā)，其性能滿足或超出監(jiān)管要求，如10CFU/mL。
4. 藥物質(zhì)量控制：qPCR法提供早期檢測(cè)支原體污染的方法，適用于藥物質(zhì)量控制，具有快速、高度特異性、靈敏性，并符合國(guó)際準(zhǔn)則。
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標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀