上海細(xì)胞支原體污染檢測試劑

來源： 發(fā)布時間：2024-08-06

預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過程中的支原體污染至關(guān)重要，因為一旦發(fā)生污染，可能會嚴(yán)重影響實驗結(jié)果和細(xì)胞的生長。以下是一些有效的預(yù)防措施：
1. 無菌操作：始終在無菌條件下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作，包括使用無菌的移液器、手套和其他實驗室器材。
2. 個人防護(hù)：穿戴適當(dāng)?shù)膫€人防護(hù)裝備，如實驗服、手套和口罩，以減少污染的風(fēng)險。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔：保持實驗室和細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔，定期進(jìn)行消毒處理。
4. 培養(yǎng)箱的維護(hù)：定期清潔和消毒CO2培養(yǎng)箱，避免飛濺和溢出，并維持嚴(yán)格的清潔計劃。
5. 使用無支原體污染的試劑：使用經(jīng)過檢測確認(rèn)無支原體污染的培養(yǎng)基、血清和其他添加物。
6. 細(xì)胞的檢測：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體污染的檢測，尤其是在引入新的細(xì)胞系或傳代細(xì)胞之前。
7. 培養(yǎng)基和試劑的過濾：使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾所有細(xì)胞培養(yǎng)用液體，以阻止支原體的通過。
8. 使用抗*素預(yù)防：雖然抗*素不能作為常規(guī)預(yù)防手段，但在某些情況下，可以考慮使用抗*素作為預(yù)防措施，尤其是在高風(fēng)險操作中。
支原體檢測方法qPCR法的應(yīng)用。上海細(xì)胞支原體污染檢測試劑

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細(xì)胞被支原體污染后可能會出現(xiàn)以下幾種情況：
1. 生長速度變慢：支原體污染的細(xì)胞生長速度可能會減慢，甚至停止生長。
2. 形態(tài)改變：部分細(xì)胞可能會變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細(xì)胞在支原體污染后，形態(tài)變化可能不明顯，但有些細(xì)胞可能會出現(xiàn)體積增大、細(xì)胞碎片增多等現(xiàn)象。
3. 培養(yǎng)液pH變化：支原體污染的細(xì)胞可能導(dǎo)致培養(yǎng)液pH值變化明顯，更換培養(yǎng)液后幾小時內(nèi)變酸（顏色變黃）。
4. 細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積：在某些情況下，細(xì)胞與細(xì)胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積，影響細(xì)胞的正常生長和傳代。
5. 細(xì)胞功能受損：支原體污染可能會影響細(xì)胞的代謝和功能，如影響細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、RNA的合成。
6. 染色體畸變：支原體污染可能會導(dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少，出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細(xì)胞產(chǎn)量受影響：對于巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的培養(yǎng)，支原體污染可能會抑制干擾素的合成和降低其活性。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：污染的細(xì)胞可能成為實驗室的污染源，影響工作區(qū)域、培養(yǎng)箱和液氮罐等。
9. 實驗結(jié)果的不確定性：使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實驗可能會得到不準(zhǔn)確的結(jié)果，影響科研的可靠性。
杭州支原體預(yù)防試劑細(xì)胞被支原體污染了會有什么影響？

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支原體去除的實驗步驟通常包括以下幾個階段：

1. 支原體檢測：在進(jìn)行去除之前，首先要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過多種方法實現(xiàn)，如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。
2. 選擇合適的去除試劑：一旦確認(rèn)存在支原體污染，需要選擇一種有效的去除試劑。
3. 去除試劑的添加：根據(jù)去除試劑的說明書，將試劑添加到受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。通常，這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中。
4. 孵育：添加去除試劑后，將細(xì)胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時間和條件（如溫度、CO2濃度）應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進(jìn)行調(diào)整。
5. 監(jiān)測去除效果：在孵育過程中，定期監(jiān)測細(xì)胞的狀態(tài)和去除效果。這可能包括觀察細(xì)胞形態(tài)、生長速率的變化，以及通過顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。
6. 后續(xù)檢測：去除過程完成后，再次使用支原體檢測方法確認(rèn)污染是否已被成功。

根據(jù)提供的信息，支原體去除試劑是一種混合制劑，通過抑制DNA和支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來取得良好的支原體清*效果，同時對細(xì)胞無傷害。它被設(shè)計為對細(xì)胞毒性小，不影響后續(xù)的細(xì)胞實驗，包括細(xì)胞活力檢測和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等。這表明使用支原體去除試劑去除支原體后，理論上不應(yīng)該對細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率產(chǎn)生負(fù)面影響。
此外，支原體污染本身會對細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率產(chǎn)生負(fù)面影響。研究表明，與未污染的細(xì)胞相比，支原體污染的細(xì)胞轉(zhuǎn)染后具有較低的基因表達(dá)水平。因此，去除支原體后，可以預(yù)期細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率會得到改善，因為移除了影響細(xì)胞正常功能的污染物。
支原體去除之后對細(xì)胞檢測有無影響？

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支原體去除試劑使用后，對支原體的檢測可能會有影響。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來殺死支原體，而對真核細(xì)胞幾乎沒有影響。然而，某些情況下，去除試劑可能會對細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外，如果去除劑的效果不徹底，可能會導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。

需要注意的是，某些支原體去除試劑可能會在去除支原體的過程中導(dǎo)致支原體膜溶解，從而釋放出支原體的DNA，這可能會在隨后的支原體核酸檢測中引起假陽性結(jié)果。因此，在去除支原體后，建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
支原體污染之后是直接丟棄還是重新培養(yǎng)？上海細(xì)胞支原體污染檢測試劑

支原體去除之后對細(xì)胞轉(zhuǎn)染有無影響？上海細(xì)胞支原體污染檢測試劑

支原體去除的原理通常涉及以下幾個方面：
1. 抗*素作用：使用特定的抗*素制劑來抑制支原體的生長和繁殖。例如，含有喹諾酮類、四環(huán)素衍生物類和大環(huán)內(nèi)酯類抗*素的混合制劑，這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。
2. 破壞細(xì)胞膜：支原體去除劑中的抑菌肽（AMPs）成分通過破壞支原體細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致支原體細(xì)胞死亡。
3. 抑制DNA復(fù)制：支原體去除劑通過抑制支原體DNA回旋酶活性，有效抑制支原體DNA的復(fù)制，從遺傳物質(zhì)著手徹底殺滅支原體。
4. 協(xié)同作用：某些支原體去除劑利用抑菌肽（AMPs）和穿膜肽（CPPs）的協(xié)同作用來除去支原體，穿膜肽能夠幫助抑菌肽更有效地穿透細(xì)胞膜，增強(qiáng)其殺滅支原體的能力。

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標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體