細胞支原體檢測試劑廠家

來源： 發(fā)布時間：2024-08-08

LAMP法，即環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification），是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。它由日本學(xué)者Notomi于2000年開發(fā)。LAMP法檢測有以下特性：
快速高效：LAMP技術(shù)可以在1小時內(nèi)把幾拷貝的目的序列迅速擴增到10^9^～10^10^拷貝，擴增效率高。
簡便性：LAMP技術(shù)不需要進行模板的預(yù)變性，減少了PCR技術(shù)升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實驗儀器的要求，同時擴增效率高，可以在較短時間內(nèi)完成檢測。
LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經(jīng)濟等優(yōu)點，已經(jīng)應(yīng)用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測等領(lǐng)域，并且還將廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測、食源安全等領(lǐng)域，具有更為廣闊的發(fā)展應(yīng)用前景。
細胞培養(yǎng)過程中支原體污染怎么預(yù)防？細胞支原體檢測試劑廠家

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支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養(yǎng)基。在細胞培養(yǎng)中，支原體污染是常見的問題，因此需要對細胞和培養(yǎng)基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查，這通常包括培養(yǎng)法和指示細胞培養(yǎng)法（DNA染色法）。同時，病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體，必要時，也可以采用指示細胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外，支原體檢測的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等，這些培養(yǎng)基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時，需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。
因此，支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養(yǎng)基，具體取決于檢測的目的和方法。
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支原體的預(yù)防可通過以下方式：
1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在，從而獲得準(zhǔn)確有效的實驗數(shù)據(jù)。
2. 改善無菌操作技術(shù)：通過提高實驗人員的操作技術(shù)和意識，避免在細胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。
3. 使用無菌設(shè)備和耗材：使用無菌的細胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材，如無菌培養(yǎng)基、血清等，減少支原體污染的風(fēng)險。
4. 定期消毒和清潔：對實驗室環(huán)境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養(yǎng)箱等，以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑：使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑，如加入細胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預(yù)防和細胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等，以預(yù)防支原體污染。
6. 提高實驗室人員對支原體污染的認識：通過科普教育和培訓(xùn)，提高實驗室人員對支原體污染的認識和預(yù)防意識。
7. 建立嚴(yán)格的實驗室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴(yán)格的實驗室管理規(guī)程，包括樣本處理、廢物處理、設(shè)備維護等，以降低支原體污染的風(fēng)險。

細胞培養(yǎng)中支原體污染會對實驗結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響，具體包括：
1. 細胞生長受影響：支原體污染可能導(dǎo)致細胞生長速度減慢，甚至停滯。
2. 細胞形態(tài)改變：支原體感*的細胞可能會出現(xiàn)形態(tài)的改變，如細胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細胞功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝、增殖、分化等生理功能。
4. 細胞產(chǎn)物改變：支原體感*可能影響細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細胞因子等生物活性物質(zhì)的表達和分泌。
5. 實驗結(jié)果不準(zhǔn)確：支原體污染會干擾實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實驗重復(fù)性差：支原體污染的細胞培養(yǎng)批次間差異大，影響實驗的重復(fù)性。
7. 影響后續(xù)實驗：支原體污染的細胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實驗，如轉(zhuǎn)染、基因編輯等，可能會影響實驗效果。
8. 影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量：支原體污染會影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量，如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費額外的時間和成本進行檢測、處理和重復(fù)實驗。
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支原體污染是細胞培養(yǎng)中普遍的問題之一，細胞庫中或正在使用的細胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng)：支原體的污染會阻礙細胞生長和增殖 
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導(dǎo)和形態(tài) 
04/ 損害膜和細胞器 
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 
06/ 時間、金錢和有價值的細胞丟失：支原體的污染會導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟損失以及研究時間損失
07/ 實驗結(jié)果的不可靠性 
08/ 生物安全問題
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細胞培養(yǎng)中支原體預(yù)防措施。細胞支原體檢測試劑廠家

方法

靈敏度

優(yōu)勢

劣勢

培養(yǎng)法

☆☆☆

ü 便捷

ü 便宜

ü 金標(biāo)準(zhǔn)

ü 費勞力

ü 耗時長

ü 需要特定的培養(yǎng)基

ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基

DNA染色

(DAPI or Hoescht)

☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 可能難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

ü 可能假陽性可能性

間接染色

☆☆☆

ü 迅速

ü 便宜

ü 易檢測

ü 費時

ü 需要細胞系指示

ELISA

☆☆

ü 迅速

ü 客觀，易判讀結(jié)果

ü 可以鑒別支原體種屬

ü 受抗體限制

ü 價格高

免疫染色

☆☆

ü 迅速

ü 可檢測支原體種屬

ü 價格略高

ü 可檢測的支原體種屬有限

放射自顯影

☆☆

ü 迅速

ü 難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

ü 費勞力

生物發(fā)光

☆☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

PCR

☆☆☆

ü 便宜

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

Real-Time PCR

☆☆☆

ü 便捷

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 結(jié)果可靠

ü 高通量

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

LAMP

☆☆

ü 便捷

ü 無需DNA提取

ü *需10min左右的實驗操作時間

ü 具有特異性

ü 高通量

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性 細胞支原體檢測試劑廠家
標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體