杭州細胞培養(yǎng)支原體檢測如何取樣

來源： 發(fā)布時間：2024-08-13

支原體是細胞外生存的 小微生物，是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。
1、支原體存在于我們周圍，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過一般的濾膜，所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對培養(yǎng)細胞的污染發(fā)生率高，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。同時又非常隱秘，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因為個頭小，能穿過0.22微米濾器，并且在實驗室內(nèi)會潛在的擴散。支原體污染使得用被污染的細胞樣本做的實驗完全失去意義和價值。
支原體去除的原理是什么？杭州細胞培養(yǎng)支原體檢測如何取樣

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支原體的預(yù)防可通過以下方式：
1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在，從而獲得準(zhǔn)確有效的實驗數(shù)據(jù)。
2. 改善無菌操作技術(shù)：通過提高實驗人員的操作技術(shù)和意識，避免在細胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。
3. 使用無菌設(shè)備和耗材：使用無菌的細胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材，如無菌培養(yǎng)基、血清等，減少支原體污染的風(fēng)險。
4. 定期消毒和清潔：對實驗室環(huán)境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養(yǎng)箱等，以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑：使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑，如加入細胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預(yù)防和細胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等，以預(yù)防支原體污染。
6. 提高實驗室人員對支原體污染的認識：通過科普教育和培訓(xùn)，提高實驗室人員對支原體污染的認識和預(yù)防意識。
7. 建立嚴格的實驗室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴格的實驗室管理規(guī)程，包括樣本處理、廢物處理、設(shè)備維護等，以降低支原體污染的風(fēng)險。
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細胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能由以下原因引起：
1. 擴增產(chǎn)物污染：PCR擴增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理，極微量的污染就可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
2. 引物設(shè)計不當(dāng)：引物設(shè)計不夠特異性，可能會與非目標(biāo)序列發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致非特異性擴增。
3. 試劑質(zhì)量問題：使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質(zhì)量不佳，可能引起非特異性擴增或假陽性結(jié)果。
4. 操作技術(shù)問題：實驗操作不規(guī)范，如混合樣本、標(biāo)簽錯誤或樣本標(biāo)識不清等，可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
5. PCR反應(yīng)條件設(shè)置不當(dāng)：不恰當(dāng)?shù)腜CR反應(yīng)條件，如溫度和時間選擇不當(dāng)，可能導(dǎo)致非特異性擴增。
6. DNA污染：PCR環(huán)境中的DNA污染會干擾結(jié)果，導(dǎo)致假陽性

細胞庫支原體檢測的必要性主要體現(xiàn)在以下幾個方面：
1. 確保細胞庫的質(zhì)量與安全性：細胞庫的建立需要為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細胞。支原體檢測是確保細胞庫中細胞質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。
2. 符合監(jiān)管要求：支原體檢測是生物制品安全性監(jiān)管的一部分，全球范圍內(nèi)的藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中都有支原體檢測的相關(guān)說明。
3. 避免對生物制品的影響：支原體污染可能會影響生物制品的安全性和有效性，因此需要通過檢測來避免這種風(fēng)險。
4. 維護細胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性：支原體是真核細胞和干細胞培養(yǎng)中最常見的問題之一，它們可以改變細胞的代謝、減緩增殖速度，甚至引起染色體畸變。
5. 預(yù)防交叉污染：由于支原體可以通過氣溶膠和微粒污染實驗室其他區(qū)域，支原體檢測有助于預(yù)防交叉污染的發(fā)生。
6. 保障數(shù)據(jù)的可靠性：支原體污染可能會影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此定期進行支原體檢測有助于保障研究數(shù)據(jù)的可靠性。
7. 常規(guī)監(jiān)測的重要性：支原體應(yīng)成為細胞培養(yǎng)實驗室的常規(guī)監(jiān)測項目，以確保細胞培養(yǎng)的質(zhì)量和安全。
8. 遵守藥典規(guī)定：根據(jù)中國藥典的規(guī)定，每8~12代細胞培養(yǎng)物應(yīng)進行支原體檢查，以符合規(guī)定。
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支原體去除的原理通常涉及以下幾個方面：
1. 抗*素作用：使用特定的抗*素制劑來抑制支原體的生長和繁殖。例如，含有喹諾酮類、四環(huán)素衍生物類和大環(huán)內(nèi)酯類抗*素的混合制劑，這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。
2. 破壞細胞膜：支原體去除劑中的抑菌肽（AMPs）成分通過破壞支原體細胞膜的完整性，導(dǎo)致支原體細胞死亡。
3. 抑制DNA復(fù)制：支原體去除劑通過抑制支原體DNA回旋酶活性，有效抑制支原體DNA的復(fù)制，從遺傳物質(zhì)著手徹底殺滅支原體。
4. 協(xié)同作用：某些支原體去除劑利用抑菌肽（AMPs）和穿膜肽（CPPs）的協(xié)同作用來除去支原體，穿膜肽能夠幫助抑菌肽更有效地穿透細胞膜，增強其殺滅支原體的能力。

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支原體檢測有哪些方法？杭州細胞培養(yǎng)支原體檢測如何取樣

目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動物、昆蟲和植物中，其中 20 +種在細胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實驗室中的傳播來源多種多樣，主要來源包括實驗室人員、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外，來自其他實驗室或商業(yè)供應(yīng)商的細胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑；非無菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液；實驗室人員；培養(yǎng)箱；液氮；空氣顆粒和氣溶膠；抗*素的過度使用；細胞培養(yǎng)器皿的不正確密封；以及其他的支原體細胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。
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標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體