深圳細(xì)胞支原體檢測(cè)方法

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2024-08-22

在人體中，支原體可以引起多種疾病。例如，支原體肺炎就是一種較為常見的由支原體引發(fā)的疾病?；颊呖赡軙?huì)出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、乏力等癥狀，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量和身體健康。支原體的傳播途徑也較為多樣。它可以通過(guò)空氣飛沫傳播，在人群密集的場(chǎng)所，如學(xué)校、辦公室等容易造成小規(guī)模的流行。此外，接觸被支原體污染的物品也可能導(dǎo)致。然而，支原體并非只有負(fù)面作用。在一些特定的環(huán)境中，支原體也可能與其他生物形成共生關(guān)系，發(fā)揮著積極的作用。例如，在一些土壤環(huán)境中，支原體可能參與有機(jī)物的分解和轉(zhuǎn)化，對(duì)生態(tài)系統(tǒng)的平衡起著一定的調(diào)節(jié)作用。對(duì)于支原體，我們既不能輕視它的危害，也不能忽視它在生態(tài)系統(tǒng)中的潛在價(jià)值。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，我們對(duì)支原體的認(rèn)識(shí)也在逐漸深入。相信在未來(lái)，我們將能夠更好地應(yīng)對(duì)支原體帶來(lái)的挑戰(zhàn)，同時(shí)也能更加充分地利用支原體的有益特性，為人類的健康和生態(tài)環(huán)境的穩(wěn)定做出更大的貢獻(xiàn)。支原體檢測(cè)PCR法和LAMP方法的優(yōu)劣勢(shì)比較。深圳細(xì)胞支原體檢測(cè)方法

深圳細(xì)胞支原體檢測(cè)方法,支原體

細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測(cè)方法有多種，以下是一些常用的檢測(cè)手段：

1. 顯微鏡檢測(cè)：通過(guò)相差顯微鏡觀察細(xì)胞，支原體在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間會(huì)呈現(xiàn)為暗色微小顆粒。
2. 熒光染色法：使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結(jié)合，使支原體的DNA著色，然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會(huì)在細(xì)胞周圍或附于細(xì)胞膜表面顯示為亮綠色小點(diǎn)。
3. 電鏡檢查：使用掃描電鏡或透射電鏡觀察，這是一種簡(jiǎn)便快速的方法。
4. 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：使用特定的引物對(duì)支原體DNA進(jìn)行擴(kuò)增，是一種高靈敏度的檢測(cè)方法。
5. 等溫?cái)U(kuò)增法：基于LAMP技術(shù)，室溫反應(yīng)后觀察顏色變化確認(rèn)是否有支原體污染。
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深圳細(xì)胞支原體檢測(cè)方法,支原體

支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)污染，它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別：
支原體污染：在相差顯微鏡下，支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。
黑膠蟲污染：在高倍鏡下，被黑膠蟲污染的細(xì)胞膜會(huì)變得模糊不清，邊界不清晰，有粗糙感。

污染的影響：
支原體污染：可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落，影響細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白表達(dá)。
黑膠蟲污染：與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開始時(shí)對(duì)細(xì)胞沒有什么影響，但當(dāng)數(shù)量多時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)受到影響直至死亡。

污染的來(lái)源：
支原體污染：可能來(lái)源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染以及用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲污染：可能來(lái)源于細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)的污染，也可能通過(guò)培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染。

巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒各有優(yōu)缺點(diǎn)，具體哪個(gè)更好要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和條件來(lái)決定。
1. 巢式PCR法通過(guò)兩輪PCR擴(kuò)增來(lái)提高檢測(cè)的特異性和靈敏度。它的優(yōu)點(diǎn)是：
2. 特異性強(qiáng)，可以減少假陽(yáng)性結(jié)果。
3. 靈敏度高，可以檢測(cè)到很低數(shù)量的支原體。
4. 通過(guò)設(shè)計(jì)多對(duì)引物，可以覆蓋多種支原體種類。
不過(guò)巢式PCR法也存在一些缺點(diǎn)：
1. 操作復(fù)雜，需要兩輪PCR反應(yīng)。
2. 容易受到PCR抑制物的影響，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 反應(yīng)后需要開蓋電泳檢測(cè)，增加了污染的風(fēng)險(xiǎn)。
而一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，具有以下優(yōu)點(diǎn)：
1. 操作簡(jiǎn)便，只需一次反應(yīng)即可完成檢測(cè)。
2. 靈敏度和特異性也很高，可檢出10個(gè)拷貝以上的支原體污染。
3. 反應(yīng)后無(wú)需開蓋，減少了污染的風(fēng)險(xiǎn)。
但一步法試劑盒的缺點(diǎn)是：
1. 靈敏度雖高，但可能略低于巢式PCR法。
2. 價(jià)格可能比巢式PCR試劑盒要高。
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深圳細(xì)胞支原體檢測(cè)方法,支原體

方法

靈敏度

優(yōu)勢(shì)

劣勢(shì)

培養(yǎng)法

☆☆☆

ü 便捷

ü 便宜

ü 金標(biāo)準(zhǔn)

ü 費(fèi)勞力

ü 耗時(shí)長(zhǎng)

ü 需要特定的培養(yǎng)基

ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基

DNA染色

(DAPI or Hoescht)

☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 可能難以判讀結(jié)果

ü 無(wú)法鑒別支原體種屬

ü 可能假陽(yáng)性可能性

間接染色

☆☆☆

ü 迅速

ü 便宜

ü 易檢測(cè)

ü 費(fèi)時(shí)

ü 需要細(xì)胞系指示

ELISA

☆☆

ü 迅速

ü 客觀，易判讀結(jié)果

ü 可以鑒別支原體種屬

ü 受抗體限制

ü 價(jià)格高

免疫染色

☆☆

ü 迅速

ü 可檢測(cè)支原體種屬

ü 價(jià)格略高

ü 可檢測(cè)的支原體種屬有限

放射自顯影

☆☆

ü 迅速

ü 難以判讀結(jié)果

ü 無(wú)法鑒別支原體種屬

ü 費(fèi)勞力

生物發(fā)光

☆☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 難以判讀結(jié)果

ü 無(wú)法鑒別支原體種屬

PCR

☆☆☆

ü 便宜

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 可能假陽(yáng)性可能性

ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

Real-Time PCR

☆☆☆

ü 便捷

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 結(jié)果可靠

ü 高通量

ü 可能假陽(yáng)性可能性

ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

LAMP

☆☆

ü 便捷

ü 無(wú)需DNA提取

ü *需10min左右的實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間

ü 具有特異性

ü 高通量

ü 可能假陽(yáng)性可能性

ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性 細(xì)胞被支原體污染了會(huì)有什么影響？杭州支原體去除試劑價(jià)格

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其次，支原體可以改變細(xì)胞的代謝過(guò)程，影響細(xì)胞的功能表達(dá)。例如，它們可能干擾細(xì)胞的基因表達(dá)、蛋白質(zhì)合成等重要生命活動(dòng)，使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失去真實(shí)性。支原體污染細(xì)胞培養(yǎng)的途徑多種多樣?？赡苁怯捎趯?shí)驗(yàn)操作不當(dāng)，如使用了被污染的試劑、培養(yǎng)基或儀器設(shè)備；也可能是由于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不潔凈，空氣中的支原體進(jìn)入培養(yǎng)體系。此外，細(xì)胞株本身也可能攜帶支原體，在傳代培養(yǎng)過(guò)程中逐漸擴(kuò)散。為了防止支原體污染細(xì)胞培養(yǎng)，科學(xué)家們采取了一系列嚴(yán)格的措施。深圳細(xì)胞支原體檢測(cè)方法

標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體