嘉興慢病毒載體整合位點(diǎn)技術(shù)

國內(nèi)外基因zhiliao產(chǎn)品開展的非臨床研究、長期隨訪獲得的臨床經(jīng)驗(yàn)以及基因組整合位點(diǎn)分析方法的明顯改進(jìn)，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao載體相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。通常認(rèn)為，很多能夠介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞核的載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、轉(zhuǎn)座子元件和基因編輯產(chǎn)品等）有基因組整合潛力，需要通過長期隨訪觀察遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)；根據(jù)目前的認(rèn)識和研究數(shù)據(jù)，質(zhì)粒、痘病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒（AAV）等載體的基因zhiliao產(chǎn)品整合風(fēng)險(xiǎn)較低，國際上開展的臨床試驗(yàn)中也表現(xiàn)出較低的遲發(fā)性不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。通過分選CAR-T 細(xì)胞,對T細(xì)胞受體(TCR)β鏈庫進(jìn)行深度測序(TCR-seq)以及慢病毒載體整合位點(diǎn)(LVIS)分析。嘉興慢病毒載體整合位點(diǎn)技術(shù)

2020年9月發(fā)布的《細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品申請臨床試驗(yàn)藥學(xué)研究和申報(bào)資料的考慮要點(diǎn)》“生產(chǎn)工藝開發(fā)的技術(shù)要求”及“質(zhì)量研究和質(zhì)量控制中的安全性研究”部分要求提供目的基因在染色體中的整合情況及提供細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化（成瘤性和致瘤性）進(jìn)行安全性研究和評估內(nèi)容。2020年2月發(fā)布的《免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中規(guī)定：探索性臨床試驗(yàn)的安全性和耐受性要考慮"外源基因隨機(jī)整合到細(xì)胞基因組形成插入突變，導(dǎo)致成瘤性和惡性轉(zhuǎn)化等"。嘉興crispr/cas9整合位點(diǎn)安全性評價(jià)目前,基因整合位點(diǎn)主要通過PCR方法分離并經(jīng)測序鑒定。

生殖毒性基因zhiliao產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)受試物的產(chǎn)品類型、作用機(jī)制、一般毒理發(fā)現(xiàn)、生物分布特征以及患者人群來評估潛在的生殖/發(fā)育毒性風(fēng)險(xiǎn)。生殖毒性試驗(yàn)的研究策略和風(fēng)險(xiǎn)評估可參考ICHS5（R3）的建議和ICHM3（R2）、S6及S9中的相關(guān)內(nèi)容。通常需要開展胚胎-胎仔發(fā)育毒性和圍產(chǎn)期毒性研究，除非有基于具體產(chǎn)品類型的特殊考慮并具有科學(xué)合理性。如果基因zhiliao產(chǎn)品擬用于有生育可能或妊娠人群，應(yīng)研究產(chǎn)品對胎兒的影響（例如細(xì)胞因子局部生成后通過胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)），開展胚胎-胎仔發(fā)育和圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)。如果在一般毒理學(xué)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有潛在的生殖qiguan毒性反應(yīng)，應(yīng)開展生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)。

f如果RCT設(shè)計(jì)不可行，申請人可能在確證性臨床試驗(yàn)中采用單臂試驗(yàn)（singlearmtrial,SAT）。在這種情況下，申請人應(yīng)解釋無法開展RCT試驗(yàn)的理由并提供相應(yīng)研究證據(jù)，并有必要利用回顧性數(shù)據(jù)、前瞻性真實(shí)世界研究、薈萃分析或流行病學(xué)調(diào)查等數(shù)據(jù)及探索性研究結(jié)果，對受試人群、主要終點(diǎn)和預(yù)期臨床療效等研究要素進(jìn)行合理說明。RCT確證性試驗(yàn)應(yīng)在可行的情況下盡量保持盲法。對于很多免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，由于研究者或醫(yī)務(wù)人員參與細(xì)胞的采集并配合操作給藥過程，可能難以對研究者設(shè)盲，這種情況下有必要采用其它方法降低試驗(yàn)的偏倚，例如對受試者設(shè)盲。如果盲法不可行，如SAT，應(yīng)設(shè)立不受研究者影響的單獨(dú)審評委員會（independentreviewcommittee，IRC），對臨床終點(diǎn)進(jìn)行判讀并作為主要終點(diǎn)的判定標(biāo)準(zhǔn)，或?qū)ρ芯空咴u估的結(jié)果進(jìn)行敏感性分析。慢病毒整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

在國家藥典委員會公布的《人用基因制品總論》（草案）的3.1條款中，特別指出：“應(yīng)檢測重組載體基因組或質(zhì)粒的完整性和均一性，載體和zhiliao序列的遺傳穩(wěn)定性”；“對于病毒載體，適當(dāng)情況下應(yīng)測定插入位點(diǎn)，并充分評估插入突變的可能性和相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)”。對此，可分別采用宿主細(xì)胞全基因組重測序方法和LM-PCR結(jié)合二代測序方法為研究人員提供整合位點(diǎn)檢測服務(wù)。通過測序分析可對整合位點(diǎn)相關(guān)基因進(jìn)行功能分析，對整合位點(diǎn)偏好性畫像，從而評估病毒載體的安全性。整合位點(diǎn)分析，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。連云港病毒整合位點(diǎn)評估

整合位點(diǎn)安全性評價(jià)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。嘉興慢病毒載體整合位點(diǎn)技術(shù)

長期隨訪的觀察時(shí)間長期隨訪的持續(xù)時(shí)間應(yīng)確保足以觀察到受試者因產(chǎn)品特性、暴露情況（生物分布和給藥途徑）等導(dǎo)致的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)不短于遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期發(fā)生時(shí)間。一般而言，針對不同類型的基因zhiliao產(chǎn)品建議如下：?具有基因組整合活性的載體（例如γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體）和轉(zhuǎn)座子元件建議觀察不短于15年。?可以產(chǎn)生持續(xù)ganran、或有潛伏再jihuo風(fēng)險(xiǎn)的細(xì)菌或病毒載體（如單純皰疹病毒）建議觀察15年或至數(shù)據(jù)表明不再存在任何風(fēng)險(xiǎn)（ganran或再jihuo）。嘉興慢病毒載體整合位點(diǎn)技術(shù)