為什么使用胎兒血清而不是新生兒血清或成人血清?胎兒血清含有較多的生長因子,丙種球蛋白(即抗體)含量較低,非胎兒血清也有。這些很重要,因?yàn)樯L因子促進(jìn)細(xì)胞存活和增殖,而抗體可以與培養(yǎng)的細(xì)胞結(jié)合。此外,與成人或新生兒相比,胎兒血清中的補(bǔ)體蛋白(補(bǔ)體)含量較低。這些補(bǔ)體具有溶解培養(yǎng)細(xì)胞和干擾免疫測定的不良作用。血清和血漿均來自全血,通過離心去除包括紅細(xì)胞在內(nèi)的成分。血漿和血清之間的區(qū)別在于,凝血蛋白存在于血漿中,但已從血清中去除。血漿一般是通過在離心前向血液中加入抗凝劑來制備的,但不會去除凝血蛋白。通過在離心前使血液凝固或通過普遍/漸進(jìn)離心來制備血清。因此,與凝血相關(guān)的纖維蛋白原和蛋白質(zhì)不存在于血清中。胎牛血清是營養(yǎng)和能量來源;生長和粘附因子;肽和類固醇元素;載體蛋白。胎牛血清經(jīng)銷商
如今已經(jīng)成為各大實(shí)驗(yàn)室“??汀钡奶ヅQ澹且环N采集自新鮮的牛血液的優(yōu)良血清。胎牛血清主要的作用就是提供基本的營養(yǎng)物質(zhì)以及提供接觸和伸展因子,有效避免細(xì)胞貼壁受到機(jī)械的損傷。如此看來胎牛血清確實(shí)發(fā)揮出非常大的作用,那么為了讓其充分發(fā)揮更大的價值該注意哪些事項(xiàng)呢?注意避免沉淀加入培養(yǎng)液,添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因?yàn)槿绻囵B(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量的黑點(diǎn),除此之外,細(xì)胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質(zhì),總之出現(xiàn)這樣的情況會極其不利于細(xì)胞的正常生長。那么為了更大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進(jìn)行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。RPMI 1640 Medium批發(fā)胎牛血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。
胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是一種取自牛胚胎的血清,常用于配置動物細(xì)胞的培養(yǎng)基。胎牛血清中含有生長因子等蛋白質(zhì),且抗體含量少。細(xì)胞生物學(xué)的研究人員通常會在培養(yǎng)基中加入一定比例的胎牛血清,以幫助維持體外培養(yǎng)(invitro)的細(xì)胞的存活。但胎牛血清的組成復(fù)雜多變,研究人員一般將其視作成分不明的混合物,認(rèn)為其可能增加實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不確定性。如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
胎牛血清保存方法:1、需要長期保存的澳洲牛血清,例如澳洲南美胎牛血清,必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)澳洲牛血清有懸浮物,例如澳洲北美胎牛血清中發(fā)現(xiàn)有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。胎牛血清天然含有粘附蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分,促進(jìn)細(xì)胞的附著、鋪展。
血清和血漿均來自全血,通過離心去除包括紅細(xì)胞在內(nèi)的成分。血漿和血清之間的區(qū)別在于,凝血蛋白存在于血漿中,但已從血清中去除。血漿一般是通過在離心前向血液中加入抗凝劑來制備的,但不會去除凝血蛋白。通過在離心前使血液凝固或通過普遍/漸進(jìn)離心來制備血清。因此,與凝血相關(guān)的纖維蛋白原和蛋白質(zhì)不存在于血清中。在人類中,以下22種蛋白質(zhì)占血清和血漿總蛋白質(zhì)含量的99%:白蛋白、總IgG、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原、總IgA、α-2-巨球蛋白、總IgM、α-1-抗胰蛋白酶、C3補(bǔ)體、結(jié)合球蛋白、α-1-酸性糖蛋白、載脂蛋白-B、載脂蛋白-A1、脂蛋白(a)、因子H、銅藍(lán)蛋白、C4補(bǔ)體、補(bǔ)體因子B、前白蛋白、C9補(bǔ)體、C1q補(bǔ)體和C8補(bǔ)體。剩下的1%包括數(shù)百種蛋白質(zhì)。更豐富的血清蛋白白蛋白,濃度為50mg/ml,約占總蛋白質(zhì)量的一半。胎牛血清嚴(yán)格質(zhì)檢,不含各種外源因子,無細(xì)胞病變效應(yīng),BVD、PI-3、IBR等病毒均為陰性。建德標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清Fetal Bovine Serum(Standard)
有些胎牛血清沒有預(yù)老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。胎牛血清經(jīng)銷商
不少小伙伴對于血清的挑選、使用和儲存等方面,都有不少疑惑,我們匯總了一些常見問題,并且針對這些問題,給出了相應(yīng)的建議供大家參考。先來看看關(guān)于血清挑選的部分:如何挑選胎牛血清?1、胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)采集血液時間是5-8月齡的未出生胎牛。2、選購時詢問是否有檢測報告,并注意檢測報告中的各類指標(biāo)。3、注意血清有效期,盡量不買過期血清。4、留心觀察相關(guān)人員是否專業(yè):血清是否全程冷鏈運(yùn)輸;是否嚴(yán)格儲存在-20℃冰箱中;工作人員對待血清態(tài)度如何;能否提供同一批次血清。胎牛血清經(jīng)銷商
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