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酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(，其生物力學(xué)強(qiáng)度極差，一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對(duì)分子質(zhì)量130000附近有明顯條帶，另一條帶的相對(duì)分子質(zhì)量大于170000(圖2)。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察。鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠。溫州正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時(shí)候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。北京鼠尾膠原服務(wù)電話鼠尾膠原，是一種細(xì)胞支持物，它是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成份。

一種基于鼠尾膠原蛋白：1.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于凍干止血材料中，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?%2%1%，余量的水。2.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級(jí)大鼠鼠尾。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于劑型為創(chuàng)可貼。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于劑型為噴霧劑。

使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時(shí)后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。2、三維膠原凝膠的制備：A、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時(shí)需要測定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠，模擬真實(shí)的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上，pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。制備鼠尾膠原：吸取上清，分裝成小瓶，4℃保存。上海鼠尾膠原廠家

免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。溫州正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用：在國外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細(xì)胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻(xiàn)c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣。溫州正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家