金華珠海鼠尾膠原

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-29

以鼠尾膠原為支架的類(lèi)似物的建立:探尋建立類(lèi)似物的培養(yǎng)方法。方法:原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞,制備鼠尾膠原,將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類(lèi)似物。結(jié)果:形成的類(lèi)似物中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論:①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類(lèi)似物,該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ);②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝。金華珠海鼠尾膠原

金華珠海鼠尾膠原,鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):通過(guò)醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。1,在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。1mg/ml濃度以上,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng)。使用方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。珠海鼠尾膠原廠家膠原蛋白是脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物支持結(jié)構(gòu)的主要組成。

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鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,收集上清液;在冰水浴中,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時(shí),去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調(diào)節(jié)pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時(shí),去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):通過(guò)醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。1,在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。1mg/ml濃度以上,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng)。使用方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡。

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鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,簡(jiǎn)化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過(guò)程中,進(jìn)行多次真空冷凍干燥,并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉;較后由滅菌、無(wú)菌包裝,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產(chǎn)率和生物相容性,降低了成本,適用于生物醫(yī)用材料,所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)。膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產(chǎn)率和生物相容性,降低了成本,適用于生物醫(yī)用材料。金華珠海鼠尾膠原

鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠作為基質(zhì)包被培養(yǎng)器皿。金華珠海鼠尾膠原

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用:在國(guó)外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞懸液的制備:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細(xì)胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。金華珠海鼠尾膠原

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