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外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費(fèi)時(shí)，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時(shí)，對(duì)離心時(shí)間極為敏感。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的。開封正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等，然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法，由于離心步驟繁瑣，費(fèi)事費(fèi)力，而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染，且損耗量大，使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對(duì)于抽提細(xì)胞上清來說，更是極為不請(qǐng)便，試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管，無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀，都具有操作極其不便的缺點(diǎn)，總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔，造成濃縮效率低，濃縮管重復(fù)利用差，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán)，造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差，對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響北京外泌體提取試劑廠家供應(yīng)外泌體提取色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對(duì)關(guān)系而對(duì)溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法。

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了一些病癥的生長(zhǎng)與侵襲。一些病癥。一些病癥轉(zhuǎn)移。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血病（AML）細(xì)胞的增殖、遷移和壓制細(xì)胞凋亡。治病靶標(biāo)。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞，以明顯降低RAS活化、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程。免疫。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動(dòng)脈硬化。分子標(biāo)記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升

外泌體在肺病進(jìn)程中的作用：肺病細(xì)胞來源外泌體（LCC-exosome）可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進(jìn)一些病癥的生長(zhǎng)。據(jù)相關(guān)報(bào)道稱，LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量，促進(jìn)一些病癥血管的生成；而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動(dòng)脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進(jìn)肺病的生血管作用。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達(dá)增加，促使人正常支氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)EMT，從而使肺支氣管正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖，遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍它普遍存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子。

將濃縮液加至20mmol/LTris/30%蔗糖/45%蔗糖(pH7.4)的密度梯度液上行4℃超速離心100000×g(水平轉(zhuǎn)子SW-41)8h,吸取位于蔗糖之上的顏色明顯較深條帶的液體約5mL,以10倍PBS稀釋混勻后再次用100-ku超濾離心管(Millipore)濃縮至5mL,將濃縮液重新以10倍PBS稀釋后4℃超速離心100000×g(角轉(zhuǎn)子TYPE50.2)4h,收集離心管底部約1mL液體及極微量沉淀(來自2×107個(gè)細(xì)胞)以20mLPBS重懸即為胞外體,用0.22μm過濾膜除菌后凍存于-80℃?zhèn)溆?。（該步驟參考文獻(xiàn)“腫瘤細(xì)胞來源胞外體的分離鑒定與功能檢測(cè)”）優(yōu)點(diǎn)是：分離得到的外泌體純度很高。缺點(diǎn)是：步驟繁瑣、耗時(shí)耗力、對(duì)離心時(shí)不好把握。外泌體提?。好芏忍荻入x心。南昌外泌體提取試劑

外泌體提取：差速離心。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術(shù)之一。開封正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論，較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要很大的離心力，從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對(duì)比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白，結(jié)果顯示，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法，超濾一般被認(rèn)為是外泌體分離過程中的一個(gè)準(zhǔn)備過程，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì)。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體，和超高速離心相比，超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時(shí)間內(nèi)分離出外泌體。但是，超濾膜對(duì)外泌體的黏附作用會(huì)降低外泌體的產(chǎn)量，并且超濾過程中施加的外力可能會(huì)使外泌體變形或者破裂。開封正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

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