影響轉染試驗的因素:1.轉染試劑跟細胞系不匹配轉染試劑跟細胞系也是講究配合默契的,使用同一種試劑,不同細胞系轉染效率通常不同。但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要,因此在轉染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然,較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。因為有些細胞系是不穩(wěn)定的,可能隨著培養(yǎng)時間的改變,培養(yǎng)條件的不同,不同的選擇壓力,可能引起不同的克隆選擇。因此就算是同一個細胞系,在不同條件下轉染能力的差異可能會很大。當復合物接近細胞膜時,通過內吞作用形成內體進入細胞。青島正規(guī)細胞高效轉染試劑廠家供應
細胞電轉染實驗的幾點建議:1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉染實驗非常重要,電場強度不能過高,過高會增加細胞的死亡率;也不能過低,過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值,實驗前應測定所轉染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態(tài)要好用于電轉的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞(15代以內,傳代后2d)。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛,表面結構致密比穩(wěn)定期的細胞差,電轉后,細胞膜的恢復能力強,而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA武漢正規(guī)細胞高效轉染試劑廠家現(xiàn)貨轉染試劑與細胞不匹配細胞轉染較適合的不是原代細胞。
細胞轉染操作方法:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法,則各有其特點
如何有效提高細胞轉染實驗效率:1.選擇合適的轉染試劑不同細胞系轉染效率通常不同,但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要,因此在轉染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然,較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。2.保持較佳的細胞狀態(tài)一般低的細胞代數(shù)(<50)能確?;蛐筒蛔?。較適合轉染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞,細胞生長旺盛,較容易轉染。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株,在各實驗室不同培養(yǎng)條件下,其生物學性狀發(fā)生不同程度的改變,導致其轉染特性也發(fā)生變化。因此,如果發(fā)現(xiàn)轉染效率降低,可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結果。轉化、轉染、轉導幾個名詞是從事生命科學研究的初學者經(jīng)常碰到的。
細胞轉染簡介:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法,則各有其特點。瞬時和穩(wěn)定表達DNA轉染后,轉入基因的表達可以在1-4天內檢測到。石家莊細胞高效轉染試劑供應商
一般的瞬時轉染 方法多采用脂質體法。青島正規(guī)細胞高效轉染試劑廠家供應
細胞轉染簡介:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。青島正規(guī)細胞高效轉染試劑廠家供應