濟南正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞（免疫細胞、神經(jīng)細胞、干細胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA，Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞，也可運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用，不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同，可作為多種疾病的早期診斷標記物，也能作為靶向藥物的載體進行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子，它可以通過外泌體從一個地方轉(zhuǎn)運到另外一個地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達變化，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能外泌體的提取、分離方法：聚合物沉淀法。濟南正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

外泌體作為近幾年來的研究熱點，受到了科研工作者的青睞及追捧。由于外泌體內(nèi)攜帶有大量的miRNA,少量lncRNA,Mrna以及DNA蛋白質(zhì)成為液體活檢的潛力無限的研究對相。所以，獲得純度高、內(nèi)容物完整的外泌體非常之重要，那么，外泌體的提取方法也顯得尤為重要。一、差速離心法差速離心法可以說是傳統(tǒng)普遍的外泌體提取方法。原理是：首先低速離心以除去細胞和細胞凋亡碎片；隨后，高速離心以去除大囊泡；高速離心以沉淀外泌體。蘇州君欣生物科技有限公司重慶正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家由于這些核酸被囊膜包裹而被保護，穩(wěn)定性高，不易降解。

可以。為了能夠高效提取細胞培養(yǎng)上清中的外泌體，磁珠可重復(fù)使用5次（同一樣品）。試劑盒里的緩沖液含5次提取需要的量。1mL體積以上細胞上清樣本建議進行濃縮后再回收，提取時可進行反復(fù)抽提，提高提取效率。用血液樣品進行實驗時，需要根據(jù)磁珠狀況來判斷是否能重復(fù)利用；若磁珠發(fā)生聚集，利用渦旋儀也無法使磁珠分散，不建議繼續(xù)使用。詳情參考操作說明書。太好了，這樣實驗成本瞬間就降下來了，那樣品純化所需的比較低量是？老師：使用旋轉(zhuǎn)器的需要500μL以上，使用離心管混合器的需要100μL。樣品量更少的情況下加TBS到所需比較低量后再使用ExosomeCapture固定化磁珠。同學：電鏡分析需要外泌體的量是多少？

外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物。外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法。

外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒，組分經(jīng)過優(yōu)化處理，適用于細胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液（腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取，并搭配純化過濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項：1.對于待測樣品粘度過大時，可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。2.當血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高，收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時，可用4℃預(yù)冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。3.針對外泌體標志蛋白（CD63,CD9,CD81等）進行Westernblot檢測，可以鑒定所提的外泌體。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。外泌體的提取方法：密度梯度離心。武漢外泌體提取試劑服務(wù)電話

外泌體提?。嚎捎糜谑占笥?00nm、400nm或200nm的外泌體。濟南正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

外泌體的提取分離：1、PEG-base沉淀法。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取。近幾年來，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。這些試劑盒不需要特殊設(shè)備，隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代，提取效率和純化效果逐漸提高，因而逐漸取代超速離心法并推廣開來。有些試劑盒操作簡便，不用超速離心，同時可獲得高純度和高回收率的外泌體。濟南正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商