糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:PAS染色時需于暗處加蓋反應,染色時間10~20min(染色時間長短取決于試劑的質(zhì)量和環(huán)境溫度,SO濃度高,染色時間適當縮短;環(huán)境溫度高,染色時間也應適當縮短,反之則需適當延長反應時間)。染色過程中不能接觸伊紅,以免造成顏色誤差[4]。作糖原染色時,較好作消化對照,即取兩張連續(xù)切片,其中一張脫蠟至水后,用1%淀粉酶于37℃消化30min,水洗后與不經(jīng)消化處理的切片一起置0.5%高碘酸液氧化,如經(jīng)消化處理的切片染色陰性,不經(jīng)消化處理的切片染色陽性,即肯定為糖原[6]。偏重亞硫酸鈉(鉀)溶液配置后,不能保存,因此,必須現(xiàn)配現(xiàn)用,用過一次即應廢棄。各種試劑必須是化學純或者分析純。器皿、染色缸必須潔凈而干燥。對鹽基性染料有親合力,因此在HE染色中、切片上的粘液呈污穢藍色。北京糖原染色試劑盒單價
糖原染色是病理學中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎?,醛不Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時應注意選擇好高碘酸濃度和氧化時間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標冸唾液的考慮,不主張應用唾液。咨詢糖原染色試劑盒服務電話糖原在肝臟及心肌疾患及某些的病變中分布和量都有一定改變。
可以通過pas染色計算糖原含量嗎:PAS染色又稱過碘酸雪夫染色,糖原染色.一般用來顯示糖元和其它多糖物質(zhì).具體現(xiàn)象例舉:陽性反應,胞漿呈紅色,陰性反應,胞漿呈無色;在正常血片中RBC不染色;PLT染成深紅色;中性粒細胞胞漿染成紅色或深紅色,有些細胞有陽性顆粒;單核細胞的胞漿染成淡紅色,可含有細小或粗大陽性顆粒;少數(shù)淋巴細胞的胞漿內(nèi)含有少許小的淡紅色或紅色顆粒;正常骨髓的幼稚細胞和有核RBC都不染色;巨核細胞的胞漿內(nèi)呈彌散紅色或深紅色.巨核細胞的胞漿內(nèi)呈彌散紅色或深紅色.顏色深淺與濃度相關(guān)
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗。應避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能較好地保存糖原,但有使糖原流動到細胞一側(cè)的現(xiàn)象,多數(shù)人認為是由于固定劑把細胞內(nèi)的糖原推向固定劑對組織浸透的方向而造成。其他組織應用中性福爾馬林固定為佳。組織在4℃左右溫度內(nèi)固定與保存,是針對糖的性質(zhì)和避免糖原溶于水而采取的相應措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此較好不單獨使用乙醇固定,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳0.5%過碘酸水溶液5分鐘?;?%過碘酸95%酒精溶液。
糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蠟切片脫蠟至水。(2)0.5%過碘酸水溶液5分鐘。或1%過碘酸95%酒精溶液(過碘酸再結(jié)晶應重新配制使用)。(3)蒸餾水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分鐘。(Schiff氏液從冰箱取出升至室溫使用)(5)流水沖洗10分鐘。(6)蘇木素浸染細胞核2-3分鐘。(7)脫水、透明、封蓋。結(jié)果:糖原呈紅色,細胞核呈藍色。試劑配制:(1)0.5%過碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏試劑。堿性品紅1g蒸餾水200ml1N鹽酸(98.3ml比重1.16鹽酸,加入蒸餾水成1000ml)20ml偏重亞硫酸鈉或鉀1g堿性品紅1g加入200ml蒸餾水,攪拌加熱沸騰,待冷卻至50℃過濾,加入當量鹽酸至25℃時加入偏重亞硫酸鈉。置于暗處,兩天后溶液變桔黃色或草黃色,然后加入少量活性碳并震蕩、過濾,此時溶液應為無色。保存冰箱備用。溶液如顯淺紅色或草黃色,染色效果較差。對某種鹽基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺藍有異染性。咨詢糖原染色試劑盒服務電話
切出的石蠟切片要好,不能有皺褶或者刀痕,切片不能太厚。北京糖原染色試劑盒單價
特殊染色方法選擇應遵循:1、特異性高、傳統(tǒng)或經(jīng)典的染色方法;特異、傳統(tǒng)/經(jīng)典的一些染色法在特殊染色方法的選擇中往往作為選擇。如顯示淀粉樣物質(zhì)。剛果紅染色作為經(jīng)典的方法,比天狼星紅、甲基紫等其他方法都要實用。淀粉樣物質(zhì)(剛果紅及天狼星紅染色)。2、染色流程相對簡便、染液易配制的染色方法;選擇染色流程簡便的方法,無論對于量較多的整批次染色,還是較少量的染色均能夠節(jié)省時間、更為便捷。選擇染液易配制的方法,對自配染液(尤其是保存較短的染液)是較為重要的選擇,不容易造成因染液配制問題而影響染色結(jié)果。如顯示彈性纖維。醛品紅染色法無論是從染色流程,還是染液配制都要比鐵蘇木精、間苯二酚堿性品紅等染色方法要簡單方便、省時,同時陽性著染對比度也很明顯。北京糖原染色試劑盒單價