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用于外泌體提取的體液收集注意事項：1、抽血技巧。操作要輕柔迅速。試管可翻轉8-10次使樣本與抗凝劑混勻，避免劇烈搖晃。混勻后，將試管固定垂直放置于離心分離器，在頂部記錄抽血的準確時間，因為抽血與離心之間的時間間隔可能是一個影響因素。外泌體在抽血后30分鐘內是比較穩(wěn)定的，若時間過長將導致外泌體數量增加。血小板極易因抽血時的物理因素而并釋放出外泌體，其中包括接觸、壓力、切力。2、抽血時間。除了血液黏度，體內血液的各項指標在1天中變化很大。生理節(jié)律會對血小板的產生很大的影響。白細胞的募集和循環(huán)系統(tǒng)中促炎細胞和細胞會隨時間變化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會隨時間變化。目前尚無設計較好的實驗對證實不同時間血液中外泌體的變化，故應在相同的時間采集樣本。目前飲食是否會對EV產生影響尚未可知，但是由于脂蛋白可運載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類型、數量和作用，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時間進行。外泌體是一種能被機體內大多數細胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質雙層膜的微小膜泡。昆明正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷

用于外泌體提取的體液收集注意事項：1、選擇血清還是血漿？推薦大多數研究選擇血漿。血液凝固過程中血小板會產生大量外泌體，含量占血清中外泌體的50%以上，選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關，這可能是因為肝素與引物和/或酶有競爭作用。除了克制PCR，肝素可以與外泌體結合，阻止細胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達莫（CTAD），CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會干擾PCR反應（盡管其程度小于肝素），但是還是優(yōu)于其他選擇。此外，有研究表明鈣螯合劑可在體外促進外泌體與血小板的結合從而降低經EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數量。使用肝素時這種影響就不會發(fā)生，因此建議在測量外泌體的精確數量時選用肝素。但是也有研究表明肝素可以導致體外條件下外泌體的減少。總之，目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對外泌體的釋放，作用和下游反應產生特異性影響。昆明正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷外泌體提取：重復離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質量。

1983年，外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發(fā)現，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規(guī)化應用的關鍵。

外泌體與免疫系統(tǒng)：不同的細胞來源的外泌體，包括免疫細胞(B細胞和樹突狀細胞)、病細胞、上皮細胞和間充質細胞，釋放出帶有載體的外泌體，可影響先天免疫系統(tǒng)和適應性免疫系統(tǒng)中受體細胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細胞可直接或間接地受到外泌體的影響，刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用。體外培養(yǎng)心血管疾病的細胞收集的外泌體與疾病相關的代謝適應有關；體外培養(yǎng)的間充質干細胞和胚胎干細胞的外泌體具有保護心血管的作用。這些發(fā)現表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA，蛋白等物質改變受體細胞的代謝狀態(tài)。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷。外泌體提取：較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑。

外泌體，是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡，具有脂質雙層膜結構，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現，但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年，人們發(fā)現這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發(fā)現外泌體在很多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體的提取分離：密度梯度離心。昆明正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷

外泌體提取：尺寸排阻色譜。尺寸排阻色譜是基于大小而非分子量實現分離大分子。昆明正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷

外泌體的提取分離：1、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質，利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。昆明正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷