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原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)：從組織制備原代細(xì)胞，即使捱過(guò)了極其嚴(yán)苛的解離步驟，不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆蛛x操作可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、表型不一致甚至細(xì)胞污染，特別是由于組織中可能含有細(xì)菌等微生物，污染問(wèn)題對(duì)于原代細(xì)胞的分離和培養(yǎng)是一個(gè)很大的隱患。而為了讓研究人員不再為這些問(wèn)題頭疼，現(xiàn)在已經(jīng)出現(xiàn)了一些細(xì)胞公司可供應(yīng)現(xiàn)成的原代細(xì)胞，并對(duì)應(yīng)配有充分優(yōu)化的培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)方案，這使得原代細(xì)胞的培養(yǎng)和研究比以往要輕松得多。而對(duì)于具備自主從組織中獲取原代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室，也建議以商業(yè)化的原代細(xì)胞作為對(duì)照，采用均一性和穩(wěn)定性更好的P2/P3代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并用專門的原代細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，較大限度提高原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。上海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒推薦廠家

原代細(xì)胞的獲?。?.培養(yǎng)時(shí)間無(wú)論是酶消化法還是組織塊法，取樣后培養(yǎng)時(shí)間較少需要一周以上的時(shí)間，期間可換液或者傳代。2.換液時(shí)間無(wú)論酶消化法還是組織塊法，在培養(yǎng)期間需要隨時(shí)關(guān)注細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，需觀察其是否貼壁，是否污染，組織塊法要觀察是否有細(xì)胞遷移出來(lái)。正常情況下48~72h可換液一次。3.細(xì)胞狀態(tài)判斷正常貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)幾天后，會(huì)逐漸貼滿整個(gè)瓶底或者皿底，有的呈纖維狀，有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細(xì)胞圖（左：小鼠成纖維細(xì)胞；右：雞胚成纖維細(xì)胞；下：人成纖維細(xì)胞）。濟(jì)南正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒單價(jià)盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。

選擇原代細(xì)胞的原因：長(zhǎng)期以來(lái)，科學(xué)家多依賴永生化的細(xì)胞系來(lái)進(jìn)行各種研究，但在過(guò)去十年，隨著細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域發(fā)生了巨大變化，新型的技術(shù)和培養(yǎng)試劑讓使用原代細(xì)胞作為研究對(duì)象成為可能。相比于細(xì)胞系，原代細(xì)胞更多保留了體內(nèi)原始組織的生物學(xué)特征，如生長(zhǎng)和衰老，因此通過(guò)原代細(xì)胞可建立更好的細(xì)胞疾病模型。原代細(xì)胞（Primarycells）是指來(lái)源組織，經(jīng)過(guò)特定分離方法制備而成的初始細(xì)胞。原代細(xì)胞離體時(shí)間短且不經(jīng)過(guò)永生化過(guò)程，其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保持原有的遺傳特征，可更好地反映細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)，從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù)，很適合用于藥物測(cè)試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。

原代細(xì)胞與細(xì)胞系：原代細(xì)胞來(lái)源于或是新近死亡的供體，通過(guò)機(jī)械或酶方法解離獲得，其方案根據(jù)來(lái)源物種（例如人，小鼠）和所涉及的組織類型而變化。通常包含以下步驟：組織切割和切碎，酶解，反復(fù)洗滌，研磨和微濾分餾，較后重新懸浮和接種收集的細(xì)胞群。對(duì)于松散的、被纖維結(jié)締包圍的組織，機(jī)械均質(zhì)化可能足以進(jìn)行解離。如果您的組織來(lái)源是外周血，差速離心便可以分離目的細(xì)胞。由于與細(xì)胞分裂相關(guān)的染色體端?？s短，原代細(xì)胞在體外的壽命有限。大約20到60次分裂后，端粒變得太短而無(wú)法承受另一個(gè)循環(huán)，導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。這種現(xiàn)象被稱為Hayflick極限。對(duì)于具有無(wú)限倍增能力的細(xì)胞系，必須通過(guò)細(xì)菌或化學(xué)誘導(dǎo)方法的轉(zhuǎn)化使其永生化。細(xì)菌對(duì)于細(xì)胞的基因編輯引入有效促進(jìn)增殖的基因（例如SV-40，E6，E7），允許細(xì)胞無(wú)限的細(xì)胞分裂1。同樣地，化學(xué)誘導(dǎo)方法（例如電離輻射，氯化鎳，苯并芘）改變?cè)?xì)胞的基因組成，也可實(shí)現(xiàn)無(wú)限增殖。為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

原代細(xì)胞培養(yǎng)的開(kāi)始傳代：原代培養(yǎng)后由于懸浮細(xì)胞增殖，數(shù)量增加甚至達(dá)飽和密度;貼壁細(xì)胞的相互匯合，使整個(gè)瓶底逐漸被細(xì)胞覆蓋，細(xì)胞難以繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖，需要進(jìn)行分瓶培養(yǎng)，這種使原代細(xì)胞經(jīng)分散接種的過(guò)程稱之為傳代。值得注意的是：每次傳代細(xì)胞在生長(zhǎng)和增殖方面受到一定的影響。開(kāi)始傳代應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：①細(xì)胞生長(zhǎng)密度不高時(shí)，不能急于傳代。②原代培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞需控制消化時(shí)間。③吹打已消化的細(xì)胞應(yīng)減少機(jī)械損傷。④開(kāi)始傳代時(shí)細(xì)胞接種數(shù)量要多一些。⑤開(kāi)始傳代培養(yǎng)的pH應(yīng)偏低些。小牛血清濃度可加大至15%～20%左右。很適合用于藥物測(cè)試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。無(wú)錫正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒供應(yīng)商

加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。上海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒推薦廠家

原代細(xì)胞培養(yǎng)：組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，較簡(jiǎn)單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘，若懸液量大，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間，但速度不能太高，延時(shí)也不能太長(zhǎng)，以避免擠壓或機(jī)械損傷細(xì)胞，離心沉淀用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次，用培養(yǎng)基洗一次后，調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后再分瓶培養(yǎng)，若選用懸液中某些細(xì)胞，常采用離心后的細(xì)胞分層液，因?yàn)椋?jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。上海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒推薦廠家