鼠尾膠原,10mg包裝,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,容量瓶配制比較準(zhǔn)確。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,吸十次不如加一次z準(zhǔn)確),加入盛膠原的瓶中,輕輕顛倒,不要震蕩,蛋白容易起泡。幾分鐘即可,蛋白質(zhì)非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,比青霉素瓶大點(diǎn)的就行。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一檔就行,避免加入氣泡。然后4度過(guò)夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進(jìn)EP管中。用封口膜封口,4度保存,勿冷凍。制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。蘇州鼠尾膠原價(jià)格
鼠尾膠原膠凝程序:膠原蛋白I按以下步驟使其pH達(dá)到堿性時(shí)凝膠。1)將無(wú)菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來(lái)制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和,把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上,暫放置一邊。2)將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,厚度可以根據(jù)需要改變,膠原蛋白I(50-100μL)足以涂覆22mm的蓋玻片。對(duì)于直徑100mm的培養(yǎng)皿,每個(gè)加入約6mL;對(duì)于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL,對(duì)于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL。3)將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4)在無(wú)菌蒸餾水中(35mm培養(yǎng)皿加5mL,60mm培養(yǎng)皿加10mL等)浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無(wú)菌蒸餾水,放置在層流罩中過(guò)夜。5)吸出蒸餾水,用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。徐州開(kāi)封鼠尾膠原鼠尾膠原醋酸溶解:氯仿的量約為膠原溶液的10%。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過(guò)程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來(lái)中和。需要的溶液(均需要無(wú)菌、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。
鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)將無(wú)組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,真空冷凍干燥備用;(2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目;(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL,期間不斷攪拌,防止凍結(jié)成塊,得到膠原溶脹液;(4)稱(chēng)取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50:I?100:1,在4°C,48?74小時(shí)酶解,期間間歇性攪拌。從包被表面除去多余的液體。過(guò)夜干燥。
使用方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被:以包被濃度為2μg/cm2為例,用無(wú)菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿(mǎn)器皿的表面。開(kāi)蓋在超凈臺(tái)上過(guò)夜晾干,也可以在室溫放置1小時(shí)后,用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。2、三維膠原凝膠的制備:A、無(wú)細(xì)胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,加入690μL雙蒸水,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值)。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)時(shí)程的記錄。貴陽(yáng)鼠尾膠原銷(xiāo)售廠家
制備鼠尾膠原:離心,4000轉(zhuǎn)/分,10-15分鐘。蘇州鼠尾膠原價(jià)格
鼠尾膠原蛋白的用途是什么:將尾巴從動(dòng)物身體切除后,會(huì)冷凍起來(lái),并提取尾巴里的筋腱。然后,將筋腱切成小塊,并在離心處理之前添加到由醋酸和水勾兌而成的混合物中。用這種方法,能將膠原蛋白從動(dòng)物材料中分離出來(lái)。在食品加工領(lǐng)域,鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中。它還可以當(dāng)作酸奶,冰淇淋,果醬和奶油芝士等食品的增稠劑使用。在一些低脂肪食品中,它用于模仿全脂食品的感覺(jué)和質(zhì)地。它還用于生產(chǎn)膳食保健品,據(jù)說(shuō)能讓手指甲和皮膚看起來(lái)更好。此外,還有基于膠原蛋白的保健品,可用于促進(jìn)關(guān)節(jié)健康。蘇州鼠尾膠原價(jià)格