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功能的區(qū)別:1、RNA的功能:mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的機(jī)械。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而其他如I、II型內(nèi)含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。2、DNA的功能:DNA有傳遞遺傳信息的功能,而蛋白質(zhì)則是由DNA的指令合成的。鑒定親子關(guān)系用得較多的是DNA分型鑒定。人的血液、毛發(fā)、唾液、口腔細(xì)胞等都可以用于用親子鑒定,十分方便。DNA是人身體內(nèi)細(xì)胞的原子物質(zhì)。每個(gè)原子有46個(gè)染色體,另外,男性的精子細(xì)胞和女性的卵子,各有23個(gè)染色體,當(dāng)精子和卵子結(jié)合的時(shí)候。這46個(gè)原子染色體就制造一個(gè)生命,因此,每人從生父處繼承一半的分子物質(zhì),而另一半則從生母處獲得。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。合肥濟(jì)南RNA提取試劑
動(dòng)物細(xì)胞RNA提取:1、懸浮細(xì)胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,用無菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來,然后再加入裂解液進(jìn)行裂解。千萬不要完全棄掉液體后,往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液,這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè),從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸,從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底,降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細(xì)胞吹下來,轉(zhuǎn)移到無RNA酶的EP管中,加裂解液進(jìn)行提取。蘇州RNA提取試劑價(jià)格細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):方便快捷的離心柱操作方式。
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會(huì)分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,容易降解,建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),如反轉(zhuǎn)錄成cDNA,NorthernBlot等總RNA提取試劑:試劑中含有酚等有害物質(zhì),注意個(gè)人防護(hù)。
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時(shí),使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時(shí)也可以有效解決組織、細(xì)胞樣品的短時(shí)間保存及運(yùn)輸問題。此外,如果將不同時(shí)期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時(shí)序變化,減少實(shí)驗(yàn)組間的誤差~RNA提取試劑:能夠作RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+選擇。廈門昆明RNA提取試劑
植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn):無需氯化銫梯度離心,無需氯化鋰或乙醇沉淀。合肥濟(jì)南RNA提取試劑
植物RNA提取:植物組織中,富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物,或RNase的活性較高。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀,很難將其去除。所以我們?cè)谔崛≈参锝M織時(shí),要選取針對(duì)植物的試劑盒,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨,研磨過程中液氮要及時(shí)補(bǔ)充,避免樣品融化,研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻,避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量,否則組織研磨及裂解不徹底,會(huì)使提取的RNA產(chǎn)量較低。3、含水分較多的植物組織例如石榴果實(shí)、西瓜果實(shí)、桃子果實(shí)等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量(可選100~200mg)。4、植物組織,如植物葉片、根莖、堅(jiān)硬的果實(shí)等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,再繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。常規(guī)的組織勻漿機(jī)對(duì)植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用。合肥濟(jì)南RNA提取試劑