細(xì)胞凍存液的原理及配制方法:細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是必不可少的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存,則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。無(wú)血清細(xì)胞凍存液,為多種保護(hù)劑組合。開封無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪家好
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn):一般來(lái)說(shuō),細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)移和保存,較佳的策略是進(jìn)行低溫保存(-70℃~-196℃),而細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故而可以長(zhǎng)期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過(guò)0~20℃階段的處理過(guò)程,在此溫度范圍內(nèi),冰晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。經(jīng)過(guò)前人的長(zhǎng)期試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇基本原則是慢凍速融,這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。杭州無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家無(wú)血清凍存液特性:適合各種動(dòng)物細(xì)胞。
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是必不可少的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存,則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。
密度過(guò)高會(huì)讓細(xì)胞沒(méi)有足夠的生存空間,密度過(guò)低會(huì)讓細(xì)胞無(wú)法互相連接健康生長(zhǎng)。建議大家在細(xì)胞接種前,一定要調(diào)整好適合細(xì)胞生長(zhǎng)的濃度,提高細(xì)胞的存活率。溫度控制不達(dá)標(biāo)慢凍快融是細(xì)胞凍存復(fù)蘇的關(guān)鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中,都會(huì)要求嚴(yán)格的梯度降溫,常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮,一定要避免溫度原因?qū)е录?xì)胞自取;除非使用了成分經(jīng)過(guò)優(yōu)化、經(jīng)過(guò)嚴(yán)格測(cè)試的凍存液,才能免去程序降溫這個(gè)繁瑣的步驟。保存的時(shí)候也要保證整個(gè)細(xì)胞都是處于液氮的液面下方,避免溫度對(duì)細(xì)胞存活的影響。含血清,細(xì)胞污染(細(xì)菌、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高。
細(xì)胞凍存,我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng):DMSO快速稀釋會(huì)對(duì)細(xì)胞造成滲透性損傷,使存活率下降50%。對(duì)于DMSO凍存的細(xì)胞,復(fù)蘇后應(yīng)緩慢稀釋成細(xì)胞懸液:1)凍存液:培養(yǎng)基=1:1稀釋成細(xì)胞懸液后離心,然后重懸至培養(yǎng)皿中培養(yǎng),隔天換液;2)凍存液:培養(yǎng)基=1:10稀釋成細(xì)胞懸液,不用離心,直接放置到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)2-4小時(shí)后,換液。上述兩種方法都是比較常用的細(xì)胞復(fù)蘇方法,后者更適用于原代細(xì)胞或比較難養(yǎng)的細(xì)胞。液氮內(nèi)的細(xì)胞凍存較長(zhǎng)時(shí)間不要超過(guò)半年,凍存在液氮中的細(xì)胞應(yīng)一段時(shí)間內(nèi)進(jìn)行更替。一個(gè)細(xì)胞系在培養(yǎng)一個(gè)月后,可復(fù)蘇一管新的細(xì)胞確保其質(zhì)量沒(méi)有發(fā)生太大變化,傳代幾次后,再凍存留種。同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞。上海正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家
無(wú)血清細(xì)胞凍存液不含牛血清,無(wú)動(dòng)物源組份。開封無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪家好
細(xì)胞冷凍的原理:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點(diǎn)降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。開封無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪家好