廣州正規(guī)外泌體提取試劑平均價格

CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα，也稱為CD172a）的配體，CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號，從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖，增強胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細(xì)胞有一定毒性作用，但使用外泌體能夠較小化對細(xì)胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn)，CD47和病基因KRAS驅(qū)動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理，并增強胰腺病細(xì)胞對外泌體的特異性。所以，外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。外泌體的提取方法：多聚物沉淀法。廣州正規(guī)外泌體提取試劑平均價格

外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs），其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同時也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定。來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。合肥外泌體提取試劑價格外泌體提?。撼瑸V膜也可用于分離外泌體。

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時，對離心時間極為敏感。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實驗。五是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。六是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢：無需蛋白酶處理。

外泌體的提取分離：1、PEG-base沉淀法。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取。近幾年來，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。這些試劑盒不需要特殊設(shè)備，隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代，提取效率和純化效果逐漸提高，因而逐漸取代超速離心法并推廣開來。有些試劑盒操作簡便，不用超速離心，同時可獲得高純度和高回收率的外泌體。外泌體提?。褐貜?fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。廣州正規(guī)外泌體提取試劑平均價格

外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢：外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白。廣州正規(guī)外泌體提取試劑平均價格

外泌體的提取、分離方法：免疫親和層析法。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法，主要用于生物大分子的分離、純化。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體，如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別，這使得提取的外泌體純度高，但是產(chǎn)量低。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法，從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白，結(jié)果表明，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix、CD9、CD63)，同時，ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性。廣州正規(guī)外泌體提取試劑平均價格