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鼠尾膠原的提取步驟：配置含4.5mmol/lNacl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-Hcl溶液（用鹽酸將其PH值調(diào)至7.5） 取鼠尾，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱，置于生理鹽水中，稱重，再倒掉生理鹽水，酒精中浸泡20分鐘 離心膠原溶液，（1200rpm10min) 取上清 每600上述粗提液加100ml0.14mol/l NaOH溶液離心，（8000rpm 5min) 其上清，留絮狀沉 10.將絮狀沉淀物置于三蒸水中，用0.1mol/l(1000:6) 醋酸溶解絮狀沉淀物，加入消毒過的攪拌 子，冷房攪拌數(shù)天，得絮狀膠原。 注意所有和膠原有關(guān)的操作都在冰上進(jìn)行\(zhòng) Rat tail collagen type 配置含4.5mmol/L NaCl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-HCl 溶液（用鹽酸將其pH值調(diào)至7.5）； 于-20冰箱中取出鼠尾，浸泡75%或70%酒精，解凍； 在一小培養(yǎng)皿中放置少量生理鹽水，置于電子秤上，調(diào)零； 取鼠尾，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱，置于生理鹽水中。制備鼠尾膠原：吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）。貴陽正規(guī)鼠尾膠原服務(wù)電話

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時(shí)呈微白色；礦化2 d后，膠體的顏色逐漸加深至乳白色；礦化6 d后，隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內(nèi)部，膠體顏色加深至純白色，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體，予鑷子夾起，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示：礦化2 d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部，膠原纖維部分礦化，沿著膠原纖維生長，忖度變深；礦化6 d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失，膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體，嵌入膠原纖維縱向生長。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時(shí)，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù)，膠原纖維呈現(xiàn)黑色，選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。天津鼠尾膠原廠家批發(fā)價(jià)整個(gè)操作請?jiān)跓o菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長。

鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠3種基質(zhì)對角膜上皮細(xì)胞增殖的影響：目的探討鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠3種基質(zhì)對體外培養(yǎng)角膜上皮細(xì)胞增殖的影響。方法采用鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠作為基質(zhì)包被培養(yǎng)器皿,以普通培養(yǎng)器皿作對照,培養(yǎng)角膜上皮細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài),進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并描繪細(xì)胞生長曲線,比較不同基質(zhì)對角膜上皮細(xì)胞的增殖作用。結(jié)果使用基質(zhì)包被的培養(yǎng)器皿培養(yǎng)角膜上皮細(xì)胞,細(xì)胞增殖速度較普通組快,細(xì)胞形態(tài)、活力和長勢比普通組更佳,促進(jìn)增殖的能力為鼠尾膠原多聚賴氨酸明膠。結(jié)論鼠尾膠原可促進(jìn)角膜上皮細(xì)胞增殖,且增殖效果優(yōu)于多聚賴氨酸和明膠。

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。

鼠尾膠原類似物的建立：目的：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ)；②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性，它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜。合肥鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。貴陽正規(guī)鼠尾膠原服務(wù)電話

使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時(shí)后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。2、三維膠原凝膠的制備：A、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時(shí)需要測定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。貴陽正規(guī)鼠尾膠原服務(wù)電話

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