I型鼠尾膠原是借鑒Navneeta Rajan, Jason Habermehl法,經(jīng)過乙酸抽提、離心、滅菌、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白,屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,可用于包被細胞培養(yǎng)器皿(單分子層包被),適合多種類型細胞的貼壁如肝臟細胞、神經(jīng)節(jié)細胞、胚胎細胞、肌細胞、肺細胞、神經(jīng)鞘細胞等。I型膠原蛋白包被細胞培養(yǎng)板,規(guī)格為6/24孔板,表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附。使用這種細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細胞,可以獲得良好的細胞貼壁率,細胞增殖速度快,形態(tài)均一,細胞培養(yǎng)成功率高。本品可用于細胞培養(yǎng)皿的包被,特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng)。昆明正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦
膠原蛋白的提取方法:酸法提?。核岱ㄌ崛≈饕捎玫碗x子濃度酸性條件浸漬處理原料,從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸,主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速,所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的,適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備,但產(chǎn)品得率低,設(shè)備腐蝕嚴重,污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下從牛腱中提取膠原蛋白,得到高純度的膠原蛋白溶液。溫州鼠尾膠原生產(chǎn)廠家鼠尾膠原,是一種細胞支持物,它是細胞外基質(zhì)的主要成份。
鼠尾膠原蛋白的用途是什么:在食品加工領(lǐng)域,鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中。它還可以當作酸奶,冰淇淋,果醬和奶油芝士等食品的增稠劑使用。在一些低脂肪食品中,它用于模仿全脂食品的感覺和質(zhì)地。它還用于生產(chǎn)膳食保健品,據(jù)說能讓手指甲和皮膚看起來更好。此外,還有基于膠原蛋白的保健品,可用于促進關(guān)節(jié)健康。在工業(yè)應用方面,鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實驗室設(shè)備的內(nèi)部涂層。設(shè)備上的膠原蛋白薄層通常被允許干燥。它還可以用來制造一種凝膠,可當作懸浮細胞的培養(yǎng)基。此外,還可以把它當膠水使用。
要準備的器具:組織剪2把,有齒鑷1把,無齒鑷1把,200 ml燒杯1個,培養(yǎng)皿1個,帶蓋廣口瓶1個,離心管、小瓶數(shù)個,滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1%醋酸溶液。經(jīng)44.48N10 min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75%酒精溶液。取大鼠尾巴,洗凈,置75%酒精浸泡消毒后,手持尾巴,用止血鉗夾住尾巴較高,折斷尾骨后拉出尾腱,將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中,稱尾腱的重量,按每克尾腱50ml 的比例加入0.1%醋酸溶液,搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置48 小時,離心。吸取其上清,分裝至小瓶,4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成。方法制作鼠尾膠原,觀察全細胞膜片鉗實驗中,自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。
鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50 mmol/L甘氨酸+200 mmol/L氯化鉀 100 mL,用1 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,倒入0.5 mL自組裝液,室溫放置20 min。予自組裝液自組裝24 h。吸取0.05%戊二醛2 mL至小培養(yǎng)皿中,將自組裝24 h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10 mmol/L 二水氯化鈣+150 mmol/L氯化鈉+50 mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,滴入聚丙烯(PAA)至濃度350 μg/mL;滴加1 mol/L的氯化氫,調(diào)節(jié)酸堿度至7.4,然后緩慢滴入25 mL磷液(6 mmol/L磷酸氫二鈉),約16滴/min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原醋酸溶解:不建議用過濾的方法無菌化。杭州貴陽鼠尾膠原
膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結(jié)構(gòu)的主要組成。昆明正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦
鼠尾膠原蛋白I型,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M 的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。 4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。昆明正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦