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銅綠假單胞菌含有O抗原(菌體抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。O抗原包含兩種成分:一種是其外膜蛋白,為保護(hù)性抗原;另一種是脂多糖,有特異性。O抗原可用以分型。銅綠假單胞菌的標(biāo)本采集,分別來(lái)自不同影響部位的各種標(biāo)本,包括血液、尿液、痰標(biāo)本、膿汁、穿刺液等。還包括來(lái)自醫(yī)院環(huán)境中的各種標(biāo)本如水、空氣、物體表面采樣等。通過(guò)染色鏡檢,銅綠假單胞菌為革蘭陰性桿菌,菌體大小(1.5~5.0)um×寬(0.5~1)um,細(xì)長(zhǎng)且長(zhǎng)短不一,有時(shí)呈球桿狀或線狀,成對(duì)或短鏈狀排列。菌體的一端有單鞭毛,無(wú)芽胞,無(wú)莢膜。銅綠假單胞菌在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)18~24h可以見(jiàn)到扁平、濕潤(rùn)的菌落。哈爾濱銅綠假單胞菌甘油菌
對(duì)于銅綠假單胞菌的檢測(cè),要注意將綠假單胞菌檢測(cè)板上層膜不干膠標(biāo)簽部分揭開(kāi),用無(wú)菌吸管吸取1毫升樣品稀釋液均勻滴加到紙片上,迅速貼好上層膜并水平晃動(dòng)檢測(cè)板,靜置2分鐘左右,待樣品稀釋液完全被吸附在濾紙上。每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)檢測(cè)板作為重復(fù)。將檢測(cè)板疊在一起,倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),36攝氏度~1攝氏度,培養(yǎng)15~24h。銅綠假單胞菌又稱綠膿桿菌,是一種常見(jiàn)的條件致病菌,屬于非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌。若為實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期保存菌種,因傳代頻繁可發(fā)生無(wú)色素變種。較低溫甘油保存法和半固體保存法兩種方法保存的菌種42攝氏度生長(zhǎng)試驗(yàn)陽(yáng)性,氧化酶陽(yáng)性,氧化葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,動(dòng)力陽(yáng)性,明較液化試驗(yàn)陽(yáng)性。銅綠假單胞菌凍干粉規(guī)格銅綠假單胞菌生長(zhǎng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高。
銅綠假單胞菌菌種在經(jīng)冷凍干燥并抽真空保存的,開(kāi)啟后必須一次使用完,不能留菌粉下次再用,另外安瓿管里大部份是用牛奶做為保護(hù)劑,里邊菌體為少數(shù),復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液在新鮮培養(yǎng)基上,并在建議的溫度下培養(yǎng)。銅綠假單胞菌菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行,轉(zhuǎn)種完畢,廢棄物應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理,以名污染周?chē)h(huán)境。銅綠假單胞菌復(fù)蘇后,應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接傳代。銅綠假單胞菌產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,創(chuàng)封閉管包裝,凍干后的菌株使用時(shí)添加配套的復(fù)蘇培養(yǎng)基后迅速而完全溶解。有著嚴(yán)格的質(zhì)檢程序,確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。銅綠假單胞菌產(chǎn)品普遍使用到食品、藥品、化妝品、水產(chǎn)品、化工等行業(yè),疾控中心、質(zhì)檢局、出入境、藥檢局等等,得到普遍好評(píng)。
銅綠假單胞菌的檢測(cè)方法成為纖維及其制品檢測(cè)銅綠假單胞菌的依據(jù)。檢測(cè)銅綠假單胞菌的操作步驟為,制備樣液;樣液在培養(yǎng)液中,置(35+2)攝氏度增菌培養(yǎng)18h~24h;挑取培養(yǎng)物,于十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板.上畫(huà)線接種,置(35土2)攝氏度分離培養(yǎng)18h~24h;取可疑菌落涂片,做革蘭氏染色,鏡檢為革蘭氏陰性菌者應(yīng)進(jìn)行生化試驗(yàn)。被檢樣品經(jīng)增菌、分離培養(yǎng)后,證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌,氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)均為陽(yáng)性者,即可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而明膠液化、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42攝氏度生長(zhǎng)試驗(yàn)三者皆為陽(yáng)性時(shí),仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。銅綠假單胞菌主要產(chǎn)生青色的色素。
銅綠假單胞菌低溫保存法主要為簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4攝氏度冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3~4個(gè)月。液氮較低溫保存法,將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至-35攝氏度時(shí),即可置于-150~-196攝氏度的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長(zhǎng)期保存。銅綠假單胞菌在普通培養(yǎng)基上可以生存并能產(chǎn)生水溶性的色素。昆明CMCC(B)10104甘油菌
銅綠假單胞菌在普通培養(yǎng)基上有著綠膿素與帶熒光的水溶性熒光素等。哈爾濱銅綠假單胞菌甘油菌
檢測(cè)銅綠假單胞菌的注意事項(xiàng),采用無(wú)菌操作進(jìn)行檢測(cè),做好器具、環(huán)境的滅菌工作。均勻取樣,應(yīng)保證所取樣品具有代表性。對(duì)樣品進(jìn)行前處理時(shí),嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,保證樣品溶液的振蕩次數(shù),使其充分混勻。畫(huà)線分離培養(yǎng)是檢測(cè)銅綠假單胞菌的關(guān)鍵步驟。分離培養(yǎng)得到的單個(gè)菌落越多越利于提高檢出率。做革蘭氏染色時(shí),涂片要薄厚均勻,菌體密度適宜。氧化酶試驗(yàn)結(jié)果是判定銅綠假單胞菌是否存在的重要依據(jù)??蓪⑵渥鳛楹Y選試驗(yàn)。如氧化酶試驗(yàn)結(jié)果為陰性,則不必再進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn),即可判定為未檢出銅綠假單胞菌。1%二甲基對(duì)苯二胺試液放置時(shí)間延長(zhǎng),試液顏色會(huì)逐漸變深,所以要現(xiàn)用現(xiàn)配。挑取菌落時(shí)要用玻璃棒,也可用木質(zhì)或竹制小棒代替,盡量不要使用金屬絲或金屬棒,防止試驗(yàn)出現(xiàn)假陽(yáng)性。哈爾濱銅綠假單胞菌甘油菌
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