Campy-Cefex 瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)添加劑

來源: 發(fā)布時間:2023-03-30

培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi),以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的較適pH條件各不相同,一般來講,細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長。值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由于營養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累,會導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對培養(yǎng)基pH條件進行控制,往往導(dǎo)致微生物生長速度下降或(和)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。當(dāng)培養(yǎng)基中酸性物質(zhì)積累導(dǎo)致H+濃度增加時,H+與弱堿性鹽結(jié)合形成弱酸性化合物,培養(yǎng)基pH不會過度降低;如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加,OH-則與弱酸性鹽結(jié)合形成弱堿性化合物,培養(yǎng)基pH也不會過度升高。在培養(yǎng)細(xì)胞時通常還需要添加藥物,以防止細(xì)菌污染。Campy-Cefex 瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)添加劑

培養(yǎng)基

通常用心、腦或其他臟器浸液配制厭氧菌培養(yǎng)基,并常需加入硫乙醇酸鈉、半胱氨酸、肉渣、還原鐵、活性炭等還原劑或除氧材料。在液體培養(yǎng)基中還可加入刃天青或亞甲基藍(lán)作為氧化還原指示劑,以觀察培養(yǎng)基的含氧程度。心、腦浸液、肝塊、肉渣中含有不飽和脂肪酸,能吸收培養(yǎng)基中的氧。硫乙醇酸鈉、半胱氨酸是較強的還原劑,能消耗溶解在培養(yǎng)基中的氧。干燥的活性炭和脫脂棉同樣能吸收培養(yǎng)基中的氧。所以培養(yǎng)基中加入還原劑和吸收材料,目的都是為造成培養(yǎng)基的缺氧環(huán)境,使培養(yǎng)基保持較低的氧化還原電勢。此外,還可在培養(yǎng)基表面加一層液體石蠟,以隔絕培養(yǎng)基與大氣的接觸。葡萄糖酵母浸粉蛋白胨瓊脂/GYP瓊脂液體培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于微生物菌株的生長、染色及細(xì)胞背景下的細(xì)胞培養(yǎng)等方面。

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細(xì)菌培養(yǎng)基之牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,氯化鈉0.5g,瓊脂1.5g,水100ml在燒杯內(nèi)加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號后,放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2-7.6,分裝在各個試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌:1.05千克每平方厘米、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養(yǎng)基:取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號,煮沸,轉(zhuǎn)用文火燉2小時。過濾,濾出的肉末干燥處理,濾液pH值調(diào)到7.5左右。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,備用。

血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,這些物質(zhì)對促進細(xì)胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。血清主要作用:提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。為了避免細(xì)胞爆破釋放DNA和蛋白質(zhì),培養(yǎng)基中常常添加DNA酶和蛋白酶等酶類。

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培養(yǎng)基的分類有幾種呢?按照培養(yǎng)基用途區(qū)分:1.基礎(chǔ)培養(yǎng)基,一類含有一般微生物生長繁殖所需基本營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。2.加富培養(yǎng)基,一類在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血、血清、動植物組織提取液制成的培養(yǎng)基。用于培養(yǎng)要求比較苛刻的某些微生物。3.選擇培養(yǎng)基,一類根據(jù)某微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基,具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌的功能,普遍用于菌種篩選等領(lǐng)域。在實際應(yīng)用過程中,常常需要調(diào)整培養(yǎng)基的組成和配方,以優(yōu)化細(xì)胞或微生物的生長和功能表現(xiàn)。改良UVM增菌液基礎(chǔ)

細(xì)菌類培養(yǎng)基則包括馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥芽瓊脂培養(yǎng)基等等。Campy-Cefex 瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)添加劑

培養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)使用5%還是10%CO2,或者根本沒有影響?一般培養(yǎng)基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3含量為每公升3.7g時,細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5g時,則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。NaHCO3的作用:培養(yǎng)基中使用了 NaHCO3-CO2 緩沖系統(tǒng),并采用開放培養(yǎng),使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶,再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度(5%) ,與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài),從而調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值。NEAA:非必須氨基酸,NEAA(非必需氨基酸) 是含幾種非必需氨基酸的合劑,添加到的原培養(yǎng)基不同,NEAA 也有不同的種類,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。Campy-Cefex 瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)添加劑

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