微滴式數(shù)字PCR技術(shù)

作為時下的熱點(diǎn)技術(shù)，數(shù)字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨(dú)、平行的微反應(yīng)單元（nL，納升級別）中，使得每個反應(yīng)單元中盡可能含有1個模板分子，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行擴(kuò)增、檢測和分布統(tǒng)計(jì)，從而實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)分子的比較 計(jì)數(shù)。（圖：數(shù)字PCR技術(shù)原理）根據(jù)微反應(yīng)單元的不同形式，數(shù)字PCR產(chǎn)品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場上主要的數(shù)字PCR產(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等。與一、二代PCR技術(shù)相比，數(shù)字PCR具有很多優(yōu)勢：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內(nèi)參和標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標(biāo)；三是微反應(yīng)單元相互獨(dú)立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴(kuò)增產(chǎn)物間的相互干擾，準(zhǔn)確度和可重復(fù)性較高。Drop-off數(shù)字PCR檢測方法的**主要優(yōu)勢是能夠能夠在一個反應(yīng)中檢測到基因組序列范圍短的同源基因突變。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)

在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測時，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對相同樣品檢測時，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-AD413檢測轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間，dPCR與qPCR的測量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時有被低估的風(fēng)險，在高于拷貝數(shù)1000時有被高估的風(fēng)險。dPCR在同一陣列上同時測量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點(diǎn)時，需要稀釋內(nèi)源性靶點(diǎn)和轉(zhuǎn)基因靶點(diǎn)在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。美國全自動多重?cái)?shù)字PCR樣品回收數(shù)字PCR是直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的定量。

數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術(shù)因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢而被廣用于轉(zhuǎn)基因食品檢測。本研究綜述了數(shù)字PCR技術(shù)的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢，梳理了數(shù)字PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測與溯源技術(shù)（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）方面的進(jìn)展和發(fā)展趨勢，以期為轉(zhuǎn)基因食品檢測領(lǐng)域提供參考依據(jù)。dPCR的擴(kuò)增過程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴(kuò)增和樣品的檢測。對于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個部件之間仍然有較大的改進(jìn)空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價值。表1中總結(jié)了部分常見的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型，以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。

數(shù)字PCR技術(shù)的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術(shù)，而是更好的補(bǔ)充和完善現(xiàn)有技術(shù)平臺。數(shù)字PCR為不同應(yīng)用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測方面。國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應(yīng)用方面，也不斷“攻城略地”。數(shù)字PCR作為當(dāng)下靈敏的核酸檢測技術(shù)，盡管目前國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)異軍突起，在臨床市場中實(shí)現(xiàn)了彎道超車，但未來仍然需要聚焦客戶需求，不斷夯實(shí)底層創(chuàng)新，同時在檢測成本、自動化、試劑盒申報(bào)注冊、出海國際化等方面不斷努力，提供更為的解決方案。國際局勢，波譎云詭。在百年未有之大變局，實(shí)現(xiàn)中華民族的偉大復(fù)興，需要國內(nèi)企業(yè)瞄準(zhǔn)技術(shù)高地，以爭分奪秒的精神，解決技術(shù)"卡脖子"的難題，不斷攻堅(jiān)克難，自主創(chuàng)新，在與國際品牌的同臺競技中，彰顯中國實(shí)力。數(shù)字PCR在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優(yōu)勢。

數(shù)字PCR的引物和探針設(shè)計(jì)規(guī)則同熒光定量PCR是類似的，具體規(guī)則如下：1、查找和選擇目標(biāo)序列設(shè)計(jì)引物和探針的第一步是得到感興趣基因的核酸序列。找到基因保守區(qū)域：基因的保守區(qū)域是指來自同一屬/種/亞型的、在某個基因上堿基序列差別很小或沒有差別的區(qū)域。根據(jù)需要，使用ClustalX或ClustalW等軟件對齊屬于同一屬/種/亞型的基因的一組序列，在對齊序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，并確保引物結(jié)合位點(diǎn)處的保守序列與其它非待檢測的屬/種/亞型的堿基序列具有較大的差異。擴(kuò)增產(chǎn)物長度（AmpliconLength）：可在75-200bp之間（產(chǎn)物長度=下游引物位置-上游引物位置+1）。3D數(shù)字PCR是基于納米流體芯片進(jìn)行檢測，通過一次檢測，將樣品分到數(shù)千個單獨(dú)的PCR。微滴式數(shù)字PCR儀器

模板 DNA 量越多，熒光達(dá)到域值的循環(huán)數(shù)越少，即 Ct 值越小。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)

PCR（PolymeraseChainReaction）技術(shù)，即聚合酶連反應(yīng)，是一種擴(kuò)大和復(fù)制目的片段DNA的技術(shù)，其發(fā)現(xiàn)對于生命科學(xué)的發(fā)展具有重要的意義。而3D數(shù)字PCR到底是什么鬼？它其實(shí)是出現(xiàn)的一款PCR儀，其具有對目的DNA分子做出定量的優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)而提供的準(zhǔn)確性、靈敏度。應(yīng)用該技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對DNA進(jìn)行精確定量，精確度可通過復(fù)制次數(shù)實(shí)現(xiàn)。通過準(zhǔn)確性的進(jìn)行定量檢測基因，有助于臨床上在、病毒等疾病作參考。同時，其具有高通量，檢測速度快，成本相對低等優(yōu)點(diǎn)，為后期精細(xì)奠定基礎(chǔ)。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)

廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司成立于2015-04-17，同時啟動了以臻準(zhǔn),美國艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia為主的數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀產(chǎn)業(yè)布局。是具有一定實(shí)力的精細(xì)化學(xué)品企業(yè)之一，主要提供數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等領(lǐng)域內(nèi)的產(chǎn)品或服務(wù)。隨著我們的業(yè)務(wù)不斷擴(kuò)展，從數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等到眾多其他領(lǐng)域，已經(jīng)逐步成長為一個獨(dú)特，且具有活力與創(chuàng)新的企業(yè)。公司坐落于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號617房，業(yè)務(wù)覆蓋于全國多個省市和地區(qū)。持續(xù)多年業(yè)務(wù)創(chuàng)收，進(jìn)一步為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)、社會協(xié)調(diào)發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。