dPCR的測量結果通常表示為含量,即拷貝數值或轉基因質量百分比,而QPCR結果通常表示為拷貝數的質量分數。目前市場上可購買到大多數轉基因標準物質,以qPCR定值的標準物質是以拷貝數(單倍體基因組當量)的質量分數來表示特性量;以dPCR定值的標準物質直接采用拷貝數比例來表示特性量。不同方法使用不同的表示方式,會造成測量結果不可比。因此質量分數、拷貝數和拷貝數比例之間的關系需要轉化,才能得到單位一致,數值可比的數據。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉換因子從拷貝數換算到質量分數。數字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子定量技術。廣東微滴式數字PCR性能特點
數字PCR技術的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術,而是更好的補充和完善現(xiàn)有技術平臺。數字PCR為不同應用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路,尤其是在臨床檢測方面,在 性疾病早期檢測、 疾病的伴隨診斷、生殖遺傳篩查等領域展現(xiàn)出良好的應用前景。國產數字PCR企業(yè)在商業(yè)化應用方面,也不斷“攻城略地”。新羿生物在檢測及 疾病伴隨診斷方面開發(fā)了一系列試劑盒,并積極推進注冊臨床試驗;領航基因聚焦在血流 (膿毒癥)及呼吸道 領域,相繼推出了多款病原菌檢測試劑盒;銳訊生物聚焦于檢測,2020年其產品獲得FDA緊急授權。除此之外,在公共衛(wèi)生領域,國產數字PCR企業(yè)針對食源性致病菌、鼠疫、蟲媒病毒等,也推出多種檢測試劑盒。賽默飛數字PCR價格數字PCR適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域。
PCR常使用目標序列的拷貝數或某一給定樣品中轉基因的百分比來體現(xiàn)方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實驗過程所用試劑的兼容性較好,在使用dPCR進行轉基因檢測時,通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術對相同樣品檢測時,兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765(12板,每板765個微單元)芯片數字PCR分析儀測定標準物質ERM-AD413檢測轉基因玉米MON810。該小組應用dPCR技術評估在qPCR定義下的靈敏度數值,在拷貝數200-700之間,dPCR與qPCR的測量結果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比,dPCR在低于拷貝數200時有被低估的風險,在高于拷貝數1000時有被高估的風險。dPCR在同一陣列上同時測量轉基因和內源性靶點時,需要稀釋內源性靶點和轉基因靶點在合理拷貝數范圍內以保證dPCR測量結果的準確性。
在熒光定量PCR應用已經如此的情況下,緣何數字PCR仍然能橫空出世?中心點在于熒光定量PCR盡管為科研和臨床市場應用提供了非常重要的檢測工具支撐,但仍然有尚未被滿足的客戶需求。熒光定量PCR需要基于標準品制作的標準曲線進行定量,屬于相對定量,操作較為復雜,且終端用戶對其結果的重復性、靈敏性、精密度、分辨率、對PCR反應抑制劑的耐受性等方面有更高的期待。數字PCR通過將反應體系進行有限稀釋至成千上萬的反應單元中,實現(xiàn)了核酸靶標的單分子擴增。PCR擴增結束后,基于終點法對陽性液滴數和總液滴數進行計數,結合泊松分布原理,從而實現(xiàn)對起始樣本的定量。其極大地簡化了操作步驟,并且大幅提高了檢測性能,尤其在低豐度或較低豐度的核酸檢測上(靈敏性可達0.001-0.0001%),其優(yōu)異的性能得到了終端用戶的認可。通過“儀器+試劑”相互配合的方式,打出了數字PCR檢測的“組合拳”。
ThermoFisherQuantStudio3D是另一個經典的芯片式數字PCR平臺,其基本的檢測流程是:將反應液加入到涂布器中,通過涂布器將反應液均勻涂布在有20000個微孔的芯片上,將芯片放在PCR儀上擴增,將芯片放入讀取儀中采取拍照的方式讀取熒光信號。操作較為復雜,整個過程在封閉的芯片中進行,污染的風險較低。STILLANaica是一個較新的數字PCR平臺,基本的檢測流程是:將反應液加入芯片,將芯片放入微滴生成擴增系統(tǒng),生成30,000個微滴單層平鋪于芯片中,PCR擴增在芯片上完成。然后將擴增后的芯片轉移至微滴閱讀分析系統(tǒng),采取拍照的方式讀取熒光信號。由于整個過程在封閉的芯片中進行,污染的風險較低。數字PCR技術min檢測下限可到2copies/ml,比qPCR靈敏度提升了100倍。銳訊數字PCR分析應用
數字PCR應用前景廣闊,可用于病原微生物檢測、基因檢測、無創(chuàng)產前篩查、測序結果驗證等領域。廣東微滴式數字PCR性能特點
了解泊松分布,我們先要從二項式分布說起,二項式分布是一個離散概率分布,它給出了m次試驗中k次成功的可能性,每次試驗的概率為p,例如當擲骰子時,二項分布給出了在10次試驗中恰好有7次擲出4的概率。在數字PCR的情況中,投擲骰子類似于將一個目標實體隨機“投擲”到一組分區(qū)中,當目標落在選定的分區(qū)中時,就是成功。如果有n個分區(qū),并且分區(qū)過程是完全隨機的,則目標出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n。該試驗重復m次,樣品中的每個分子一次。如下所示的二項式分布給出了k個成功的概率,即所選分區(qū)恰好包含k個分子的概率。數字PCR通常采用大量分區(qū)。當n很大,并且嘗試成功的概率(1/n)很小時,二項分布可以近似為泊松分布。廣東微滴式數字PCR性能特點
廣州雙螺旋科學儀器有限公司是一家集研發(fā)、制造、銷售為一體的****,公司位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號617房,成立于2015-04-17。公司秉承著技術研發(fā)、客戶優(yōu)先的原則,為國內{主營產品或行業(yè)}的產品發(fā)展添磚加瓦。主要經營數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀等產品服務,現(xiàn)在公司擁有一支經驗豐富的研發(fā)設計團隊,對于產品研發(fā)和生產要求極為嚴格,完全按照行業(yè)標準研發(fā)和生產。臻準,美國艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia為用戶提供真誠、貼心的售前、售后服務,產品價格實惠。公司秉承為社會做貢獻、為用戶做服務的經營理念,致力向社會和用戶提供滿意的產品和服務。數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀產品滿足客戶多方面的使用要求,讓客戶買的放心,用的稱心,產品定位以經濟實用為重心,公司真誠期待與您合作,相信有了您的支持我們會以昂揚的姿態(tài)不斷前進、進步。