雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR原理

來源: 發(fā)布時間:2023-01-16

naica®六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng),源于crystal微滴芯片數(shù)字PCR技術(shù),自動化微滴生成和擴增,每個樣本孔可實現(xiàn)6熒光通道的檢測,智能化識別微滴并進行質(zhì)控,3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標基因的一定程度上拷貝數(shù)濃度,融合傳統(tǒng)微滴式和芯片式優(yōu)勢,被稱為下一代數(shù)字PCR技術(shù)。只需一步移液操作,將PCR反應(yīng)液加載于創(chuàng)新型微流控芯片,naica®六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)即可自動生成單層平鋪的2D微滴陣列,隨后對每個微滴進行溫度均勻一致的PCR擴增后,進行六通道熒光信號采集,計數(shù)陰陽性微滴,通過泊松分布計算獲得靶標基因一定程度上拷貝數(shù)濃度。三重ddPCR檢測體系存在的問題:不同位點檢測體系之間的cross-reactivity。雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR原理

數(shù)字PCR的引物和探針設(shè)計規(guī)則同熒光定量PCR是類似的,具體規(guī)則如下:1、查找和選擇目標序列設(shè)計引物和探針的第一步是得到感興趣基因的核酸序列。找到基因保守區(qū)域:基因的保守區(qū)域是指來自同一屬/種/亞型的、在某個基因上堿基序列差別很小或沒有差別的區(qū)域。根據(jù)需要,使用ClustalX或ClustalW等軟件對齊屬于同一屬/種/亞型的基因的一組序列,在對齊序列的保守區(qū)域設(shè)計引物,并確保引物結(jié)合位點處的保守序列與其它非待檢測的屬/種/亞型的堿基序列具有較大的差異。擴增產(chǎn)物長度(AmpliconLength):可在75-200bp之間(產(chǎn)物長度=下游引物位置-上游引物位置+1)。珠三角銳訊數(shù)字PCR性能特點使用數(shù)字PCR技術(shù)對436例非小細胞肺*樣品進行檢測,并挑選樣本驗證一致性。

數(shù)字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。該技術(shù)將一個樣本分成幾到幾十萬份,分配到不同的反應(yīng)單元,每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子(DNA模板),在每個反應(yīng)單元中分別對目標分子進行PCR擴增;擴增結(jié)束后,將有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,終根據(jù)泊松分布原理以及陽性微滴的比例,計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量:不再依賴于Ct值和標準曲線,直接給出靶序列的起始濃度,實現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性:數(shù)字PCR可實現(xiàn)萬分之一稀有樣本的定量,可用于極微量核酸樣本檢測、復(fù)雜背景下的稀有突變檢測、表達量微小差異鑒定、單細胞基因表達等方面。數(shù)字PCR在分子診斷領(lǐng)域?qū)l(fā)揮巨大的作用,數(shù)字PCR適用于生物標志物研究、拷貝數(shù)變異分析、微生物檢測、轉(zhuǎn)基因生物檢測、mRNA和miRNA檢測、基因相對表達研究等,并對遺傳病、、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段,具有廣的、不可替代的應(yīng)用前景。

數(shù)字PCR技術(shù)的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術(shù),而是更好的補充和完善現(xiàn)有技術(shù)平臺。數(shù)字PCR為不同應(yīng)用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路,尤其是在臨床檢測方面,在 性疾病早期檢測、 疾病的伴隨診斷、生殖遺傳篩查等領(lǐng)域展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應(yīng)用方面,也不斷“攻城略地”。新羿生物在檢測及 疾病伴隨診斷方面開發(fā)了一系列試劑盒,并積極推進注冊臨床試驗;領(lǐng)航基因聚焦在血流 (膿毒癥)及呼吸道 領(lǐng)域,相繼推出了多款病原菌檢測試劑盒;銳訊生物聚焦于檢測,2020年其產(chǎn)品獲得FDA緊急授權(quán)。除此之外,在公共衛(wèi)生領(lǐng)域,國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)針對食源性致病菌、鼠疫、蟲媒病毒等,也推出多種檢測試劑盒。數(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子定量技術(shù)。

目前dPCR主要有兩種形式,芯片式和液滴式,但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。可以使用幾種不同的方法來分配樣品,包括微孔板,毛細管,油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數(shù)量,根據(jù)泊松分布的原理,反應(yīng)體系中目標分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算,從而解決了多個目標分子存在于單個液滴中的可能性。臻準推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品:AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。華南地區(qū)微滴式數(shù)字PCR熒光通道

全自動數(shù)字PCR一體機可以適用于包括醫(yī)療檢測領(lǐng)域在內(nèi)的多種應(yīng)用場景。雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR原理

相比于qPCR,dPCR在轉(zhuǎn)基因檢測中具有以下優(yōu)勢:(1)檢測靈敏度高:理論上dPCR的靈敏度可達1個拷貝,而實際應(yīng)用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數(shù)值非常接近,所以dPCR可以在非常低的目標拷貝數(shù)下得到精確的結(jié)果;通常轉(zhuǎn)基因比參考基因(內(nèi)源基因)濃度低很多;(2)前處理簡單且受基質(zhì)成分干擾較?。篸PCR反應(yīng)效率和精密度受到食品基質(zhì)成分干擾影響較小,可應(yīng)用于混合基質(zhì)樣品中低豐度DNA的檢測;(3)dPCR對抑制劑的敏感性較低:由于dPCR結(jié)果表示為“有熒光“或“無熒光”,即使存在抑制劑降低了熒光強度仍可以表示為“有熒光;(4)適合多重轉(zhuǎn)基因檢測:食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉(zhuǎn)基因片段,可以進行多重dPCR檢測,提高分析效率。同時,dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾,適合單一、雙重及多重轉(zhuǎn)基因標準物質(zhì)研究,一次可識別不同的轉(zhuǎn)基因區(qū)域。下面詳細進行說明。雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR原理

廣州雙螺旋科學儀器有限公司是以提供數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀為主的有限責任公司(自然),雙螺旋科學儀器是我國精細化學品技術(shù)的研究和標準制定的重要參與者和貢獻者。雙螺旋科學儀器致力于構(gòu)建精細化學品自主創(chuàng)新的競爭力,將憑借高精尖的系列產(chǎn)品與解決方案,加速推進全國精細化學品產(chǎn)品競爭力的發(fā)展。