作為時下的熱點技術,數(shù)字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨、平行的微反應單元(nL,納升級別)中,使得每個反應單元中盡可能含有1個模板分子,并在此基礎上進行擴增、檢測和分布統(tǒng)計,從而實現(xiàn)靶標分子的比較 計數(shù)。(圖:數(shù)字PCR技術原理)根據微反應單元的不同形式,數(shù)字PCR產品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前,市場上主要的數(shù)字PCR產品主要是基于微滴式和芯片式,如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等。與一、二代PCR技術相比,數(shù)字PCR具有很多優(yōu)勢:一是特異性、靈敏性均有顯著提高;二是在不依賴內參和標準曲線的前提下,可直接得到比較 量化指標;三是微反應單元相互獨立、封閉,避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴增產物間的相互干擾,準確度和可重復性較高。三重ddPCR檢測體系存在的問題:不同位點檢測體系之間的cross-reactivity。蘇州雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR市場前景
在使用dPCR進行轉基因檢測時,通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術對相同樣品檢測時,兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765(12板,每板765個微單元)芯片數(shù)字PCR分析儀測定標準物質ERM-AD413檢測轉基因玉米MON810。該小組應用dPCR技術評估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值,在拷貝數(shù)200-700之間,dPCR與qPCR的測量結果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比,dPCR在低于拷貝數(shù)200時有被低估的風險,在高于拷貝數(shù)1000時有被高估的風險。dPCR在同一陣列上同時測量轉基因和內源性靶點時,需要稀釋內源性靶點和轉基因靶點在合理拷貝數(shù)范圍內以保證dPCR測量結果的準確性。蘇州雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR市場前景數(shù)字PCR主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法。
引物設計(DesignPrimers):引物長度(PrimerLength):18-25個堿基之間。短的引物更易于同靶序列結合,但過短的引物也更可能同基因組上的多個區(qū)域相結合而產生非特異性擴增產物。更長的引物會提高同靶序列結合的特異性,但過長的引物(>30bp)同靶序列結合速度變慢,降低結合率。引物長度和組成直接影響引物Tm值(PrimerMeltingTemperature)和退火溫度(AnnealingTemperatures)。引物的組成——GC%含量(GCContent):指引物總堿基中G和C堿基數(shù)量的百分比,該值應在40-60%之間。如果模板序列的GC含量較高,推薦使用較高Tm值的引物。
數(shù)字PCR平臺的評價指標有:分割單元數(shù),熒光通道數(shù),操作復雜性和污染風險。但是重要的是檢測準確性,評估數(shù)字PCR平臺的一種方法是使用多個數(shù)字PCR平臺互相驗證,另一種方法是使用定值準確的標準物質。目前的三代的PCR技術各有各的優(yōu)缺點,也各有各的應用領域,并不是一代取代一代的關系。技術的不斷進步給PCR技術注入了新的活力,使其能解鎖一個又一個的應用方向,使核酸檢測更方便、更準確。目前dPCR儀器的價格仍然十分昂貴,但隨著系統(tǒng)加工工藝的改進以及使用較便宜的材料,聚合成更小的體積[556],其價格將會不斷的降低,使其應用到更多的檢測中。臻準推出新款數(shù)字PCR產品:AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。
數(shù)字PCR技術的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術,而是更好的補充和完善現(xiàn)有技術平臺。數(shù)字PCR為不同應用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路,尤其是在臨床檢測方面,在 性疾病早期檢測、 疾病的伴隨診斷、生殖遺傳篩查等領域展現(xiàn)出良好的應用前景。國產數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應用方面,也不斷“攻城略地”。新羿生物在檢測及 疾病伴隨診斷方面開發(fā)了一系列試劑盒,并積極推進注冊臨床試驗;領航基因聚焦在血流 (膿毒癥)及呼吸道 領域,相繼推出了多款病原菌檢測試劑盒;銳訊生物聚焦于檢測,2020年其產品獲得FDA緊急授權。除此之外,在公共衛(wèi)生領域,國產數(shù)字PCR企業(yè)針對食源性致病菌、鼠疫、蟲媒病毒等,也推出多種檢測試劑盒。影響dPCR定量結果的因素:儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準確性以及結果表達方式。華南地區(qū)微滴式數(shù)字PCR生命科學用品
數(shù)字PCR的兩大應用場景在于基因檢測、無創(chuàng)出生缺陷篩查。蘇州雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR市場前景
近年來,全球各個地區(qū)特別是工業(yè)發(fā)達地區(qū)都把發(fā)展精細化學品作為傳統(tǒng)化工產業(yè)結構升級調整的重點發(fā)展戰(zhàn)略之一, 其化工產業(yè)均向著“多元化”及“精細化”的方向發(fā)展。精細化學品是指能增進或賦予一種(類)產品以特定功能或本身擁有特定功能的小批量制造和應用的、技術密度高、附加值高,純度高的化學品,是基礎化學品進一步深加工的產物。伴隨著我國國民經濟的不斷發(fā)展,作為為多個行業(yè)服務的儀器儀表批發(fā);商品批發(fā)貿易(許可審批類商品除外);商品零售貿易(許可審批類商品除外);教學設備的研究開發(fā);辦公設備耗材批發(fā);生物技術開發(fā)服務;生物技術推廣服務;計算機批發(fā);生物技術轉讓服務;農業(yè)科學研究和試驗發(fā)展;醫(yī)學研究和試驗發(fā)展;自然科學研究和試驗發(fā)展;水處理設備的研究、開發(fā);食品科學技術研究服務;環(huán)保設備批發(fā);辦公設備批發(fā);行業(yè),在過去的幾十年間得到了飛速發(fā)展。精細化工總產值占化工行業(yè)總產值的比例為精細化率,精細化率的高低在一定程度上體現(xiàn)了一個地區(qū)經濟發(fā)展水平、高科技進步程度等諸多方面。精細化工產品生產的主要原料是基礎化工產品。我國化工有限責任公司(自然)經過多年發(fā)展,已建立了較為完整的化工產業(yè)體系,化工產品品種齊全,一些重要原材料具備了較大的生產能力和產量基數(shù),并有十余種主要化工產品產量居世界前列。蘇州雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR市場前景
廣州雙螺旋科學儀器有限公司是國內一家多年來專注從事數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀的老牌企業(yè)。公司位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號617房,成立于2015-04-17。公司的產品營銷網絡遍布國內各大市場。公司業(yè)務不斷豐富,主要經營的業(yè)務包括:{主營產品或行業(yè)}等多系列產品和服務??梢愿鶕蛻粜枨箝_發(fā)出多種不同功能的產品,深受客戶的好評。公司秉承以人為本,科技創(chuàng)新,市場先導,和諧共贏的理念,建立一支由數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀**組成的顧問團隊,由經驗豐富的技術人員組成的研發(fā)和應用團隊。廣州雙螺旋科學儀器有限公司依托多年來完善的服務經驗、良好的服務隊伍、完善的服務網絡和強大的合作伙伴,目前已經得到精細化學品行業(yè)內客戶認可和支持,并贏得長期合作伙伴的信賴。