深圳國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)

數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術(shù)因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢(shì)而被廣用于轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)。本研究綜述了數(shù)字PCR技術(shù)的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢(shì)，梳理了數(shù)字PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)與溯源技術(shù)（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）方面的進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì)，以期為轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)領(lǐng)域提供參考依據(jù)。dPCR的擴(kuò)增過(guò)程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴(kuò)增和樣品的檢測(cè)。對(duì)于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個(gè)部件之間仍然有較大的改進(jìn)空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價(jià)值。表1中總結(jié)了部分常見(jiàn)的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型，以及相對(duì)在硬件、便攜性、性價(jià)比和自動(dòng)化程度上的比較。數(shù)字PCR主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門(mén)研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法。深圳國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)

數(shù)字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。該技術(shù)將一個(gè)樣本分成幾到幾十萬(wàn)份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個(gè)單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子(DNA模板)，在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增結(jié)束后，將有熒光信號(hào)的微滴判讀為1，沒(méi)有熒光信號(hào)的微滴判讀為0，終根據(jù)泊松分布原理以及陽(yáng)性微滴的比例，計(jì)算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量：不再依賴于Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接給出靶序列的起始濃度，實(shí)現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性：數(shù)字PCR可實(shí)現(xiàn)萬(wàn)分之一稀有樣本的定量，可用于極微量核酸樣本檢測(cè)、復(fù)雜背景下的稀有突變檢測(cè)、表達(dá)量微小差異鑒定、單細(xì)胞基因表達(dá)等方面。數(shù)字PCR在分子診斷領(lǐng)域?qū)?huì)發(fā)揮巨大的作用，數(shù)字PCR適用于生物標(biāo)志物研究、拷貝數(shù)變異分析、微生物檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)、mRNA和miRNA檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究等，并對(duì)遺傳病、、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段，具有廣的、不可替代的應(yīng)用前景。深圳國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)從市場(chǎng)規(guī)模來(lái)看，目前數(shù)字PCR市場(chǎng)規(guī)模并不大，全球約1.5億至2.5億美元。

本次推出的全自動(dòng)數(shù)字PCR一體機(jī)可以適用于包括醫(yī)療檢測(cè)領(lǐng)域在內(nèi)的多種應(yīng)用場(chǎng)景。對(duì)于可以實(shí)現(xiàn)早期篩查、早期診斷、用藥指導(dǎo)以及監(jiān)測(cè)的復(fù)發(fā)。對(duì)于病原體可以實(shí)現(xiàn)超多重檢測(cè)，以利于快速診斷。在優(yōu)生優(yōu)育領(lǐng)域也可以實(shí)現(xiàn)更多遺傳性疾病的診斷和檢測(cè)。對(duì)于臨床應(yīng)用具有極大的潛力和價(jià)值。通過(guò)線上+線下的方式舉行了數(shù)字PCR2.0技術(shù)方案研討會(huì)，來(lái)自醫(yī)療界的**學(xué)者共聚一堂，圍繞PCR技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用進(jìn)行交流和討論。歡迎咨詢廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司。

dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)值或轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。目前市場(chǎng)上可購(gòu)買到大多數(shù)轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以qPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以拷貝數(shù)（單倍體基因組當(dāng)量）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)來(lái)表示特性量；以dPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)直接采用拷貝數(shù)比例來(lái)表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，會(huì)造成測(cè)量結(jié)果不可比。因此質(zhì)量分?jǐn)?shù)、拷貝數(shù)和拷貝數(shù)比例之間的關(guān)系需要轉(zhuǎn)化，才能得到單位一致，數(shù)值可比的數(shù)據(jù)。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉(zhuǎn)換因子從拷貝數(shù)換算到質(zhì)量分?jǐn)?shù)。全自動(dòng)數(shù)字PCR平臺(tái)，讓數(shù)字PCR真正邁入新時(shí)代，助推數(shù)字PCR普及應(yīng)用。

目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過(guò)PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒(méi)有模板的反應(yīng)器就沒(méi)有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度?？梢允褂脦追N不同的方法來(lái)分配樣品，包括微孔板，毛細(xì)管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過(guò)假設(shè)分子種群遵循泊松分布來(lái)估計(jì)不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應(yīng)體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)可以通過(guò)公式A=-ln[(N-X)/N]*N計(jì)算，從而解決了多個(gè)目標(biāo)分子存在于單個(gè)液滴中的可能性。dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。美國(guó)銳訊數(shù)字PCR性能特點(diǎn)

臻準(zhǔn)推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品：AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。深圳國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)

在精細(xì)診療領(lǐng)域，患者外周血中的循環(huán)DNA（ctDNA），在的早期篩查，圍術(shù)期監(jiān)測(cè)，藥物療效評(píng)估，預(yù)后等方面具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。在肺液體活檢領(lǐng)域，EGFR突變由于其在東亞人群中的高突變率,實(shí)現(xiàn)精細(xì)檢測(cè)顯得尤為重要。研究表明，相較于熒光定量PCR，數(shù)字PCR對(duì)于血液ctDNA的檢測(cè)靈敏度更高（0.01%），EGFR突變的陽(yáng)性檢出率也更高。在患者術(shù)后復(fù)發(fā)檢測(cè)中，數(shù)字PCR評(píng)估出的ctDNA陽(yáng)性，可以早于影像學(xué)數(shù)月提前揭示出患者復(fù)發(fā)。因此，該項(xiàng)技術(shù)在肺精細(xì)診療中具有重要的作用。深圳國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)

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