廣東全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR市場(chǎng)前景

數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)步驟包括：1）試劑配制：將10xdPCRBuffer、dPCR酶、引物和探針、無(wú)核酸酶水混合成dPCR預(yù)混液，并分裝到8聯(lián)排管中或96孔板中；將各待測(cè)樣本的核酸模板、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照分別加入相應(yīng)的8聯(lián)排管中或96孔板中；2）芯片進(jìn)樣：在小海龜BioDigital·青全自動(dòng)樣品處理系統(tǒng)上進(jìn)行芯片上反應(yīng)液進(jìn)樣和液滴生成；3）芯片擴(kuò)增：在小海龜BioDigital·青PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行芯片上PCR擴(kuò)增反應(yīng)；4）芯片閱讀：在小海龜BioDigital·青生物芯片閱讀儀上進(jìn)行芯片上熒光信號(hào)閱讀；5）數(shù)據(jù)分析：使用生物芯片數(shù)據(jù)分析·青軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和報(bào)告導(dǎo)出；在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測(cè)時(shí)，通常直接參照qPCR的方法。廣東全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR市場(chǎng)前景

基于微滴的QX100dPCR儀，利用油包水技術(shù)，將樣品平均分配到20000個(gè)微滴油包水中，利用微滴分析儀對(duì)微滴進(jìn)行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR儀，在高壓氣體驅(qū)動(dòng)下，將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系分割成包含100萬(wàn)至1000萬(wàn)個(gè)皮升級(jí)別微滴的反應(yīng)乳液。數(shù)字PCR就形成了2大派別，芯片式和微滴式。不論是哪種數(shù)字PCR，其原理都是有限稀釋?zhuān)K點(diǎn)PCR和泊松分布。將含有核酸模板的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系，平均分配成幾萬(wàn)個(gè)PCR反應(yīng)，分配到芯片或微滴中，使每個(gè)反應(yīng)中盡可能含有一個(gè)模板分子，進(jìn)行單分子模板PCR反應(yīng)，通過(guò)讀取熒光信號(hào)的有或無(wú)進(jìn)行計(jì)數(shù)，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)泊松分布的校準(zhǔn)進(jìn)行定量。華南地區(qū)雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR樣品回收我國(guó)數(shù)字PCR市場(chǎng)的整體規(guī)模、公司影響力、行業(yè)話語(yǔ)權(quán)等也將迎來(lái)進(jìn)一步提升，從而助推行業(yè)高質(zhì)量創(chuàng)新發(fā)展。

基于數(shù)字PCR技術(shù)平臺(tái)，塔歌生物成功地開(kāi)發(fā)了胎兒染色體非整倍體(T21,T18和T13)無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查試劑盒（數(shù)字PCR-NIPT），并已完成數(shù)百例臨床樣本驗(yàn)證。數(shù)字PCR-NIPT的陽(yáng)性檢出率和NGS相似，且成本接近血清學(xué)，可以在上述應(yīng)急策略中取代血清學(xué)作為靈敏度和特異性更高的初篩方法，以有效提高陽(yáng)性檢出率，降低需要復(fù)篩的假陽(yáng)性樣本數(shù)和節(jié)省總的篩查成本。數(shù)字PCR應(yīng)用前景廣闊，可用于病原微生物檢測(cè)、基因檢測(cè)、無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查、測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證等領(lǐng)域。但目前，大多數(shù)醫(yī)院采購(gòu)的數(shù)字PCR儀器是用于科研層面，在臨床應(yīng)用上仍處于起步階段，未得到普遍應(yīng)用。

了解泊松分布，我們先要從二項(xiàng)式分布說(shuō)起，二項(xiàng)式分布是一個(gè)離散概率分布，它給出了m次試驗(yàn)中k次成功的可能性，每次試驗(yàn)的概率為p，例如當(dāng)擲骰子時(shí)，二項(xiàng)分布給出了在10次試驗(yàn)中恰好有7次擲出4的概率。在數(shù)字PCR的情況中，投擲骰子類(lèi)似于將一個(gè)目標(biāo)實(shí)體隨機(jī)“投擲”到一組分區(qū)中，當(dāng)目標(biāo)落在選定的分區(qū)中時(shí)，就是成功。如果有n個(gè)分區(qū)，并且分區(qū)過(guò)程是完全隨機(jī)的，則目標(biāo)出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n。該試驗(yàn)重復(fù)m次，樣品中的每個(gè)分子一次。如下所示的二項(xiàng)式分布給出了k個(gè)成功的概率，即所選分區(qū)恰好包含k個(gè)分子的概率。數(shù)字PCR通常采用大量分區(qū)。當(dāng)n很大，并且嘗試成功的概率(1/n)很小時(shí)，二項(xiàng)分布可以近似為泊松分布。數(shù)字PCR具有諸多優(yōu)點(diǎn)，但也存在一定的不足，如成本高、儀器操作復(fù)雜、經(jīng)濟(jì)效益低等。

現(xiàn)有dPCR分析方法采用熒光探針和基于光的檢測(cè)方法來(lái)鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物。這些方法要求足夠的靶分子擴(kuò)增以產(chǎn)生足以被檢測(cè)到的信號(hào)，但可能會(huì)導(dǎo)致額外的錯(cuò)誤或偏差，因此，希望能夠提供一種改進(jìn)的、用于檢測(cè)樣品內(nèi)感興趣的核酸的方法，其采用替代性分析方法，具有提高的準(zhǔn)確度和精確度，并且其具有可以與基于dPCR的方法關(guān)聯(lián)使用的靈敏度。dPCR還在樣品內(nèi)進(jìn)行單一反應(yīng)，但是所述樣品被分離成大量的分區(qū)(partition)，并且所述反應(yīng)在每個(gè)分區(qū)中單獨(dú)進(jìn)行。這種分離允許對(duì)核酸量進(jìn)行靈敏的測(cè)量。DPCR已被證明可有效用于研究基因序列中的變異，例如拷貝數(shù)變異或點(diǎn)突變。影響dPCR定量結(jié)果的因素：儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準(zhǔn)確性以及結(jié)果表達(dá)方式。廣州醫(yī)療系統(tǒng)認(rèn)證數(shù)字PCR性能特點(diǎn)

dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。廣東全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR市場(chǎng)前景

在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測(cè)時(shí)，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對(duì)相同樣品檢測(cè)時(shí)，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問(wèn)題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個(gè)微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-AD413檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評(píng)估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間，dPCR與qPCR的測(cè)量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時(shí)有被低估的風(fēng)險(xiǎn)，在高于拷貝數(shù)1000時(shí)有被高估的風(fēng)險(xiǎn)。dPCR在同一陣列上同時(shí)測(cè)量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點(diǎn)時(shí)，需要稀釋內(nèi)源性靶點(diǎn)和轉(zhuǎn)基因靶點(diǎn)在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。廣東全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR市場(chǎng)前景

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