液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基的對應詞,是微生物或動植物細胞的液狀培養(yǎng)基。它具有進行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)的優(yōu)點。在靜止的條件下,在菌體或培養(yǎng)細胞的周圍,形成透過養(yǎng)分的壁障,養(yǎng)分的攝入受到阻礙。由于在通氣或在振蕩的條件下,可消除這種阻礙以及增加供氧量,所以有利于細胞生長,提高生產(chǎn)量。培養(yǎng)基的配制:配料:配方換算→在容器中加入少量水→按照配方稱取各種藥品,依次加入→加足所需水量一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋。溶解:淀粉溶解:少量冷水調成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95~97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。調PH:用1N的鹽酸或的1NNaOH把培養(yǎng)基調節(jié)到所要求的值。過濾:濾紙或棉花進行過濾。培養(yǎng)基制備器分裝好的培養(yǎng)基應立即進行滅菌。江西進口分裝機
種子培養(yǎng)基:種子培養(yǎng)基是供孢子發(fā)芽、生長和大量繁殖菌絲體,并使菌體長得粗壯,成為活力強的“種子”。所以種子培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分要求比較豐富和完全,氮源和維生素的含量也要高些,但總濃度以略稀薄為好,這樣可達到較高的溶解氧,供大量菌體生長繁殖。種子培養(yǎng)基的成分要考慮在微生物代謝過程中能維持穩(wěn)定的pH,其組成還要根據(jù)不同菌種的生理特征而定。一般種子培養(yǎng)基都用營養(yǎng)豐富而完全的天然有機氮源,因為有些氨基酸能刺激孢子發(fā)芽。但無機氮源容易利用,有利于菌體迅速生長,所以在種子培養(yǎng)基中常包括有機及無機氮源。較后一級的種子培養(yǎng)基的成分好好能較接近發(fā)酵培養(yǎng)基,這樣可使種子進入發(fā)酵培養(yǎng)基后能迅速適應,快速生長。廣東分裝機報價培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質,易被污染或變質。
培養(yǎng)基防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、病菌及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進行驗證。實際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產(chǎn)前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。另外,應將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴格分開,并有各自自立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對無毒區(qū)應保持相對負壓,防止病毒對培養(yǎng)細胞(尤其是細胞庫)的污染。
滅菌:分裝好的培養(yǎng)基應立即進行滅菌。滅菌的方法種類如下:1.高壓蒸汽滅菌法:大多數(shù)熱培養(yǎng)基都可用此法,小量分裝時,用121℃、15min;滅菌量大時,用121℃、30min滅菌;含糖類的培養(yǎng)基只能113℃~115℃、15min滅菌,避免糖類遭破壞。2.煮沸滅菌:對含有不耐高溫物質的培養(yǎng)基,可使用此方法。3.過濾除菌:以過濾的方法除菌,用無菌操作技術,定量加入培養(yǎng)基。血液、物品可用無菌操作技術抽取,加入冷卻到50℃左右的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基含有不耐熱的物質時,可用此法。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
培養(yǎng)基的分類:培養(yǎng)基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中,隨該批培養(yǎng)基同時滅菌,以為測定該批培養(yǎng)基較終pH之用。培養(yǎng)基根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。廣東分裝機報價
全自動培養(yǎng)基制備分裝系統(tǒng):運行過程順滑無聲;大程度的削減了噪音。江西進口分裝機
含瓊脂的培養(yǎng)基有時在平板上不凝固或凝固不好問題:在此種情況下,建議對于需要高壓滅菌的培養(yǎng)基,倒入平板前先搖一搖。主要是瓊脂培養(yǎng)基的分子量比較大,在冷卻過程中容易沉淀到底,造成瓊脂不能均勻分布。對于無需高壓滅菌的培養(yǎng)基,不能直接煮沸溶解后倒入平板、需要重復三至五次煮沸溶解過程,因一次無法保證瓊脂完全溶解。微生物培養(yǎng)基成分中含有染料或指示劑;不同批次的粉狀培養(yǎng)基含水量不同。一般要求≤6。含水量越高,顏色越深;研磨時間越長,顏色越深等三個原因。江西進口分裝機
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