上海瓊脂培養(yǎng)基制備器

來源: 發(fā)布時間:2024-07-27

培養(yǎng)基配置原則:選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì),總體而言,所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子、水及能源,但由于微生物營養(yǎng)類型復(fù)雜,不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的,因此首先要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡單的無機(jī)物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物,因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以(或應(yīng)該)由簡單的無機(jī)物組成。在該培養(yǎng)基配制過程中并未專門加入其他碳源物質(zhì),而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。就微生物主要類型而言,有細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌、原生動物、藻類及病毒之分,培養(yǎng)它們所需的培養(yǎng)基各不相同。在實(shí)驗(yàn)室中常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(或簡稱普通肉湯培養(yǎng)基)培養(yǎng)細(xì)菌,用高氏I號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)放線菌,培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基,培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。上海瓊脂培養(yǎng)基制備器

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制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基:培養(yǎng)基滅菌后,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時進(jìn)行。(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺上放1支長0.5-1米左右的木條,厚度為1厘米左右,將試管頭部枕在木條上,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基。(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺上,點(diǎn)燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養(yǎng)皿蓋,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,待培養(yǎng)基凝固后,再5個培養(yǎng)皿一疊,倒置過來,平放在恒溫箱里,24小時后檢查,如培養(yǎng)基末長雜菌,即可用來培養(yǎng)微生物。上海瓊脂培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。

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培養(yǎng)基配制方法:正確制備培養(yǎng)基是微生物檢驗(yàn)的較基礎(chǔ)步驟之一,使用脫水培養(yǎng)基和其他成分,尤其是含有有毒物質(zhì)(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應(yīng)遵守良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說明。培養(yǎng)基的不正確制備會導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)質(zhì)量問題。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時,應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配制。如重量(體積)、pH、制備日期、滅菌條件和操作步驟等。實(shí)驗(yàn)室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時,應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制,并記錄相關(guān)信息,如:培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質(zhì)含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實(shí)施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便溯源。

Systec培養(yǎng)基準(zhǔn)備器的工作模式:它擁有2個主要工作模式與2個附加模式可供選擇,參數(shù)可自己設(shè)置。1.標(biāo)準(zhǔn)模式:制備標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基、或高敏感性培養(yǎng)基。滅菌溫度/時間及分裝時間均可設(shè)置。2.巧克力瓊脂模式:一種特殊的2步制備程序,可制備復(fù)雜培養(yǎng)基。在一次滅菌后可通過補(bǔ)料口添加營養(yǎng)物質(zhì),如血液等,然后進(jìn)行二次升溫。3.水浴模式:正式滅菌前在30–80°C下,對培養(yǎng)基進(jìn)行溶解處理。在滅菌鍋中可以放置玻璃器皿,并對玻璃器皿中的液體進(jìn)行水浴加熱。4.滅菌模式:啟用滅菌模式后,可以當(dāng)作普通的臺式滅菌器,用來對少量試管、燒瓶等玻璃器皿滅菌。培養(yǎng)基制備器系統(tǒng)自動調(diào)整供給樣品劑量保證了重現(xiàn)性結(jié)果。

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常用培養(yǎng)基的制備及注意事項(xiàng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馀囵B(yǎng)基的配制原理;掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟;了解常見滅菌、清毒基本原理及方法;掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用較普遍和較普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基,有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)胞生長繁殖所需要的較基本的營養(yǎng)物質(zhì),所以可供微生物生長繁殖之用。干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。培養(yǎng)基制備器解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。上海瓊脂培養(yǎng)基制備器

培養(yǎng)基制備器滅菌鍋關(guān)閉放氣閥前,將鍋內(nèi)氣體排干凈。上海瓊脂培養(yǎng)基制備器

在制備培養(yǎng)基時,通常要考慮以下因素:(1)pH值多數(shù)細(xì)胞系在pH=7.4下生長得很好。盡管各細(xì)胞株之間細(xì)胞生長*pH值變化很小,但一些正常的成纖維細(xì)胞系以pH=7.4~7.7,轉(zhuǎn)化細(xì)胞以pH=7.0~7.4更合適。據(jù)報(bào)道,上皮細(xì)胞以pH=5.5合適。為確定*佳pH值,做一個簡單的生長實(shí)驗(yàn)或特殊功能分析酚紅常用作指示劑,pH=7.4呈紅色,pH=7.0變橙色,pH=6.5變黃色,而pH=7.6呈紅色中略帶藍(lán)色,pH=7.8呈紫色。由于對顏色的觀察有很大的主觀性,因而必須用無菌平衡鹽溶液和同樣濃度的酚紅配一套標(biāo)準(zhǔn)樣,放在與制備培養(yǎng)基相同的瓶子中。(2)緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對培養(yǎng)物有營養(yǎng)作用,因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。(3)滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點(diǎn)降低或蒸汽壓升高測定。如果自己配培養(yǎng)基,可通過測定滲透壓防止稱量和稀釋等造成的誤差。上海瓊脂培養(yǎng)基制備器