陜西高通量篩選新技術(shù)

時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（TR-FRET）原理為具有長壽命熒光(通常為100秒的毫秒至毫秒)的鑭系配合物用作FRET供體，熒光蛋白或有機(jī)熒光團(tuán)(例如，別藻藍(lán)素或Cy5)用作受體。普通熒光的半衰期為納秒級，鑭系元素的半衰期為毫秒級，有6個數(shù)量級的差別。所以在檢測時，TR-FRET有一個時間延遲～100微秒，從而使反應(yīng)體系內(nèi)普通背景熒光信號消耗掉，因此TR-FRET的背景信號非常低，能夠反映樣品實(shí)際情況。基于細(xì)胞水平的篩選的關(guān)鍵特征之一是可以一次篩選多個靶標(biāo)。基于細(xì)胞的篩選常用于以下情況下：1)所需的分子靶標(biāo)未知，2)靶標(biāo)無法在生化測定中充分重組，3)所需的表型只存在于細(xì)胞環(huán)境中，例如從一種細(xì)胞類型分化到另一種細(xì)胞類型?；诩?xì)胞的檢測貫穿于藥物發(fā)現(xiàn)的所有階段：靶標(biāo)選擇和驗(yàn)證、初步篩選、先導(dǎo)化合物識別、先導(dǎo)化合物優(yōu)化以及安全和毒理學(xué)篩選。介紹一些細(xì)胞水平分析的方法：細(xì)胞活力、報告基因、第二信使和高內(nèi)涵成像等。高通量篩選菌種實(shí)驗(yàn)。陜西高通量篩選新技術(shù)

高通量篩選技術(shù)是指以分子水平和細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)方法為基礎(chǔ)，以微板形式作為實(shí)驗(yàn)工具載體，以自動化操作系統(tǒng)執(zhí)行試驗(yàn)過程，以靈敏快速的檢測儀器采集實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)，以計算機(jī)分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，在同一時間檢測數(shù)以千萬的樣品，并以得到的相應(yīng)數(shù)據(jù)庫支持運(yùn)轉(zhuǎn)的技術(shù)體系，它具有微量、快速、靈敏和準(zhǔn)確等特點(diǎn)。簡言之就是可以通過一次實(shí)驗(yàn)獲得大量的信息，并從中找到有價值的信息。高通量篩選時每天要對數(shù)以千萬的樣品進(jìn)行檢測，工作枯燥，步驟單一，操作人員容易疲勞、出錯。自動化操作系統(tǒng)由計算機(jī)及其操作軟件、自動化加樣設(shè)備、溫孵離心設(shè)備和堆棧4個部分組成。自動化操作系統(tǒng)代替人工操作顯然有諸多優(yōu)勢，它利用計算機(jī)通過操作軟件控制整個實(shí)驗(yàn)過程，編程過程簡潔明了。陜西高通量篩選新技術(shù)高通量篩選技術(shù)的靶點(diǎn)是。

高通量篩選時每天要對數(shù)以千萬的樣品進(jìn)行檢測，工作枯燥，步驟單一，操作人員容易疲勞、出錯。自動化操作系統(tǒng)由計算機(jī)及其操作軟件、自動化加樣設(shè)備、溫孵離心設(shè)備和堆棧4個部分組成。自動化操作系統(tǒng)代替人工操作顯然有諸多優(yōu)勢，它利用計算機(jī)通過操作軟件控制整個實(shí)驗(yàn)過程，編程過程簡潔明了。微量篩選系統(tǒng) 由于高通量篩選采用的是細(xì)胞、分子水平的篩選模型．樣品用量一般在微克級（μg），節(jié)省了樣品資源，奠定了“一藥多篩”的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時節(jié)省了實(shí)驗(yàn)材料，降低了單藥篩選成本。

藥物研發(fā)與開發(fā)是一個復(fù)雜與漫長的過程，特別是小分子藥物的研發(fā)，其難點(diǎn)和關(guān)鍵在于如何快速高效的找到先導(dǎo)化合物（LeadCompound）。采用高通量藥物篩選（High-throughputscreening，HTS）來發(fā)現(xiàn)新的先導(dǎo)化合物仍然是小分子藥物研發(fā)的優(yōu)先。傳統(tǒng)藥物篩選是一個耗時長且昂貴的過程，一般需要消耗大量的樣品和實(shí)驗(yàn)動物，對技術(shù)人員的操作技能有較高要求，難以在短時間內(nèi)對一定數(shù)量的樣品開展有效和經(jīng)濟(jì)的篩選。隨著各類化合物樣品庫儲量的不斷增加以及組合化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，采用傳統(tǒng)手段篩選海量樣品不僅不可能而且極大地限制了新藥研究之進(jìn)程。高通量篩選的具備條件。

根據(jù)計算原理，虛擬藥物篩選分為基于小分子結(jié)構(gòu)的篩選和基于藥物作用機(jī)理的篩選兩類，前者通過對已知具有相同作用機(jī)理的化合物進(jìn)行定量構(gòu)效關(guān)系研究，繪制出藥物的藥效團(tuán)模型，依照模型對化合物數(shù)據(jù)庫進(jìn)行搜索，這種篩選技術(shù)本質(zhì)上是一種數(shù)據(jù)庫搜索技術(shù)；后者主要應(yīng)用分子對接技術(shù)，實(shí)施這種篩選需要獲知藥物作用靶標(biāo)的分子結(jié)構(gòu)，通過分子模擬手段計算化合物庫中的小分子與靶標(biāo)結(jié)合的能力，預(yù)測候選化合物的生理活性。 建立合理的藥效團(tuán)模型、準(zhǔn)確測定或預(yù)測靶標(biāo)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)、精確和快速地計算候選化合物與靶標(biāo)相互作用的自由能變化是進(jìn)行虛擬藥物篩選的關(guān)鍵，也是限制虛擬篩選準(zhǔn)確性的瓶頸。雖然虛擬篩選的準(zhǔn)確性有待提高，但是其快速廉價的特點(diǎn)使之成為發(fā)展為迅速的藥物篩選技術(shù)之一。菌種高通量篩選實(shí)驗(yàn)。陜西高通量篩選新技術(shù)

組合化學(xué)高通量篩選。陜西高通量篩選新技術(shù)

我國進(jìn)行藥物高通量篩選的優(yōu)勢首先是化合物來源，且多為天然；其次是對化合物生物活性的篩選目的較明確，無目的合成的化合物較少；第三，我國傳統(tǒng)藥物為篩選研究提供了一個巨大的資源庫，可從中藥中提取分離篩選新的化合物。這些優(yōu)勢為藥物的高通量篩選打下了堅實(shí)基礎(chǔ)。我國藥物高通量篩選初現(xiàn)規(guī)模：藥物高通量篩選工作在我國起步較晚，且不規(guī)范。近幾年，我國進(jìn)行了外引內(nèi)聯(lián)的整體化、規(guī)?；A(chǔ)建設(shè)，已初見成效。1996年中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院引進(jìn)國內(nèi)臺Biomek2000型實(shí)驗(yàn)自動化工作站；1998年又引進(jìn)臺Topcount微量閃爍計數(shù)器，使放射配基實(shí)驗(yàn)、放射免疫實(shí)驗(yàn)等技術(shù)微量化、自動化。上海藥物研究所、北京醫(yī)學(xué)科學(xué)院分別成立了藥物篩選專門機(jī)構(gòu)，開始從事大規(guī)模篩選工作。陜西高通量篩選新技術(shù)