藥效評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法

我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和抗心衰藥物組。其中正常對(duì)照組未攝入維拉帕米，模型對(duì)照組與抗心衰藥物組都攝入了等量的維拉帕米（維拉帕米通過(guò)溶解到養(yǎng)魚(yú)用水中的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)）?？剐乃ニ幬锝M在攝入維拉帕米的同時(shí)加入地高辛、美托洛爾類的抗心衰藥物。服用一段時(shí)間抗心衰藥物后，觀察斑馬魚(yú)心包水腫和靜脈淤血的情況；用心跳血流分析系統(tǒng)檢測(cè)心搏出量和血流速度的情況。可以看到，服用抗心衰藥物組的心包面積和靜脈瘀血面積與未攝入維拉帕米的正常對(duì)照組基本相似，沒(méi)有明顯的心衰情況。利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)鎮(zhèn)痛作用。藥效評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法

靜脈注射給予長(zhǎng)春瑞濱造模斑馬魚(yú)抵抗力低下模型。大劑量長(zhǎng)春瑞濱骨髓抑制明顯，導(dǎo)致血小板、紅細(xì)胞及白細(xì)胞數(shù)目（中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等）減少和貧血，導(dǎo)致抵抗力低下。人類與斑馬魚(yú)在免疫系統(tǒng)的細(xì)胞組成上極為相似，而且斑馬魚(yú)是目前所有同時(shí)具有特異性免疫和非特異性免疫動(dòng)物個(gè)體中體積較小的，適合高通量評(píng)價(jià)調(diào)節(jié)免疫功效。斑馬魚(yú)靜脈注射大劑量長(zhǎng)春瑞濱后可造成免疫低下。采用轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞紅色熒光斑馬魚(yú)，可在熒光顯微鏡在觀察到抵抗力低下的斑馬魚(yú)體內(nèi)的T細(xì)胞熒光強(qiáng)度明顯減弱如何確定藥物的有效劑量利用斑馬魚(yú)模型實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)通便功效。

貧血是指人體外周血紅細(xì)胞容量減少，低于正常范圍下限的一種常見(jiàn)的臨床癥狀。溶血性貧血是由于紅細(xì)胞的破壞增速、增多，超過(guò)造血補(bǔ)償能力范圍時(shí)所發(fā)生的一種貧血。斑馬魚(yú)造血系統(tǒng)的形成，包括紅系、髓系、淋系及巨核系為主的造血系統(tǒng)，其相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路同人類有高度的同源性，這些特點(diǎn)使斑馬魚(yú)在人類造血系統(tǒng)和血液疾病的研究中有著更加大量的應(yīng)用。研究表明，苯肼是一種溶血?jiǎng)１诫伦饔糜诩t細(xì)胞膜，加速膜表面亮氨酸、賴氨酸及組氨酸的水解，使大量紅細(xì)胞迅速遭到破壞；同時(shí)可選擇性地氧化膜骨架和α珠蛋白，并將磷脂酰絲氨酸易位至紅細(xì)胞表面，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形性降低，增強(qiáng)紅細(xì)胞黏附到細(xì)胞外基質(zhì)的能力從而破壞循環(huán)血中的成熟紅細(xì)胞，使血紅蛋白變性聚集、形成Heinz小體，使得紅細(xì)胞的破壞速度遠(yuǎn)大于機(jī)體紅細(xì)胞再造的能力，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生溶血性貧血。用鄰聯(lián)茴香胺染色法對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行特異性染色（呈紅色），貧血斑馬魚(yú)心臟部位的紅細(xì)胞較正常斑馬魚(yú)明顯減少。由于斑馬魚(yú)早期出現(xiàn)血液循環(huán)時(shí)胚胎透明，在解剖顯微鏡下可以觀察到。

藥物開(kāi)發(fā)理論上是一個(gè)有邏輯、有步驟的過(guò)程，在這一過(guò)程中，早期小規(guī)模研究的信息用于支持規(guī)模更大、目的性更強(qiáng)的后續(xù)研究。因此各期臨床研究的目的是不盡相同的。I期臨床試驗(yàn)I期臨床試驗(yàn)是初步的臨床藥理學(xué)及人體安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)。目的：I期臨床中耐受性試驗(yàn)?zāi)康氖菍?duì)新藥的人體初步安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，是評(píng)價(jià)人體對(duì)藥物的耐受性、了解藥物動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)分類、藥物代謝和藥物相互作用的研究、評(píng)估藥物活性。內(nèi)容：為達(dá)到以上目的，就需要進(jìn)行劑量——耐受性研究（即初試劑量和耐受性評(píng)估），單劑量、多劑量的藥物動(dòng)力學(xué)和/或藥效學(xué)研究，藥物相互作用研究。利用斑馬魚(yú)模型實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)降糖功效。

細(xì)胞色素P450酶是許多同工酶組成的超大家族，主要位于肝臟微粒體中，參與生物體許多內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的生物轉(zhuǎn)化。許多臨床相關(guān)藥物間的相互作用與抑制和/或誘導(dǎo)CYP酶有關(guān)，改變CYP酶的活性對(duì)藥效有重要影響，有時(shí)甚至?xí){生命。在眾多肝臟細(xì)胞色素P450酶家族中，CYP3A4和CYP2D6與70%以上的藥物代謝有關(guān)，其中CYP3A4占50%以上，而CYP2D6占20%左右，因此目前藥物代謝研究集中于評(píng)價(jià)藥物對(duì)CYP3A4和CYP2D6的影響。我們?cè)u(píng)價(jià)斑馬魚(yú)對(duì)細(xì)胞色素P450的影響作用有2個(gè)指標(biāo)：1.對(duì)CYP3A4的影響作用；2.對(duì)CYP2D6的影響作用。利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松癥。測(cè)試藥物的安全性試驗(yàn)

利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)帕金森病防治作用。藥效評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法

基于斑馬魚(yú)模型實(shí)驗(yàn)，可進(jìn)行活性化合物發(fā)現(xiàn)、高通量藥物篩選、藥效評(píng)價(jià)、安全性評(píng)價(jià)、生物學(xué)質(zhì)量控制等臨床前研究，實(shí)驗(yàn)周期短、成本低，結(jié)果直觀，助力醫(yī)藥企業(yè)的藥物研發(fā)、品控及宣傳推廣。利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激。斑馬魚(yú)的基因與人類基因的相似度達(dá)到87％，與哺乳動(dòng)物對(duì)外源化學(xué)物質(zhì)的防御機(jī)制相當(dāng)，包括酶的誘導(dǎo)和氧化應(yīng)激。當(dāng)生物暴露在環(huán)境污染物中，生物可能會(huì)發(fā)生氧化應(yīng)激，主要表現(xiàn)為活性氧（ROS）產(chǎn)生和消耗的不平衡。在需氧生物的活細(xì)胞中，活性氧被一種由水和脂溶性低分子量自由基清除劑、特異性抗氧化酶組成的抗氧化防御機(jī)制解。應(yīng)用ROS特異性熒光檢測(cè)試劑，它的水解產(chǎn)物能被ROS氧化為高熒光物質(zhì)，用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光值反映氧化應(yīng)激的程度。本方法已被授予國(guó)家發(fā)明專利。藥效評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法