超微顯微鈣成像nVista3.0

解決鈣離子信號和BOLD信號轉換：功能核磁共振成像主要依賴于神經元興奮后局部耗氧與血流振幅的不一致，通過測定血氧水平依賴性（BOLD）信號間接反映神經元活動。而鈣成像技術則是直接通過鈣離子濃度變化反映神經元活動。將這兩種技術聯用，需要考慮BOLD信號和鈣離子濃度變化之間的轉換。研究人員通過卷積函數比較好化的將鈣離子信號轉換為BOLD信號，實現這兩者之間比較大的關聯。研究人員利用鈣離子指示劑工具小鼠發(fā)現在低頻刺激下（0.009–0.08赫茲），小鼠皮層鈣離子活動變化與BOLD信號的一致性比較好。此外，鈣離子活動變化與BOLD功能連接的關聯存在區(qū)域的依賴性：鈣離子和BOLD連接強度相關性在桶狀皮層與同側半球內的腦區(qū)呈正相關關系（同步化），但與對側半球內的腦區(qū)呈負相關。這種區(qū)域功能依賴性表明BOLD的連接來自于不同細胞群的協同神經活動。鈣離子成像可以追蹤神經元動作電位。超微顯微鈣成像nVista3.0

想要對鈣離子的動態(tài)變化進行有效的檢測，鈣離子指示劑的選擇顯得尤為重要。鈣離子熒光指示劑在未結合鈣離子前幾乎無熒光，與鈣離子結合后，熒光強度明顯增強。利用這一原理，可以通過指示劑的信號強弱來觀察細胞內鈣離子濃度水平的變化。根據激發(fā)光波長范圍，鈣離子指示劑可以分為可見光激發(fā)和紫外光激發(fā)，而根據其工作原理又可以分為比率和非比率型。常見的鈣離子指示劑有，紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針、可見光激發(fā)Ca2+熒光探針、轉基因Ca2+指示劑。重慶inscopix鈣成像代理鈣成像技術（calcium imaging）是指利用鈣離子指示劑或指示監(jiān)測組織內鈣離子濃度的方法。

單光子顯微技術是較成熟的熒光顯微技術，但由于其使用的激發(fā)光波長較短，成像深度有限；能量較大,會造成對熒光物質的漂白,光毒性嚴重。激光共焦掃描顯微鏡由于共焦顯微鏡的孔徑很小,實現樣本三維成像要逐點掃描,成像速度慢,對樣本損害大,很難用于長時間活細胞成像。而寬場顯微鏡能夠很好地實現實時動態(tài)成像,光漂白小,因而較早應用于活細胞內的實時檢測，但寬場顯微鏡由于離焦信號的干擾,難以實現多維成像。Derrick想重點介紹一下較為常用的觀察設備——雙光子熒光顯微鏡（Two-PhotonLaser-ScanningMicroscopy）。雙光子顯微成像技術是近些年發(fā)展起來的結合了共聚焦激光掃描顯微鏡和雙光子激發(fā)技術的一種新型非線性光學成像方法,采用長波激發(fā)，能對組織進行深層次成像。常用的比較好激發(fā)波長大多位于800-900nm，而水、血液和固有組織發(fā)色團對這個波段的光吸收率低，此外散射的激發(fā)光子不能激發(fā)樣品，因此背景第，光損傷小，適用于在體檢測。雙光子熒光成像技術能準確定位細胞內置入的微電極位置，從而觀察胞體、樹突甚至單個樹突棘的活性。研究者可完整的觀察神經組織的分辨熒光圖像,甚至可以分辨神經細胞單個樹突棘中的鈣分布。

鈣是機體的組成元素之一。鈣離子作為電流載體維持細胞內外的電化學梯度，同時在細胞的生命活動中扮演著重要角色。作為第二信使，鈣參與細胞周期、細胞代謝、細胞分化、壞死、凋亡等等許多重要的生理過程。細胞內的鈣離子水平通常很低，一般胞漿中的自由鈣約為100nM。胞內的鈣可被各種亞細胞器所貯存，據文獻報道：其中約50%位于細胞核，30%位于線粒體，14%位于內質網，5%位于胞膜上，1%位于胞質內，且因為鈣離子易與磷酸和碳酸復合物形成不溶物，故游離鈣只占[1]。細胞可以通過鈣內流、內鈣釋放及膜系統(tǒng)上的降鈣蛋白等一整套完整的監(jiān)控系統(tǒng)來維持細胞內鈣的內穩(wěn)狀態(tài)。例如與鈣內流相關的通道例如電壓門控性鈣離子通道VDCC、受體活躍的通道RACC；與內鈣釋放相關的受體如內質網上的IP3受體；以及降鈣相關的脂膜及線粒體上的主動運輸的鈣泵系統(tǒng)等等[2]。近20年來鈣的熒光成像及測定技術發(fā)展迅速，出現了各種各樣的鈣熒光指示劑，結合不斷發(fā)展的顯微成像系統(tǒng)，我們可以對活細胞的鈣離子進行測定及成像，進一步揭示其生理機制及相關疾病的發(fā)病機制。鈣成像的熒光指示劑鈣成像的熒光探針一般均為Ca2螯合劑EGTA，APTRA，BAPTA的衍生物，它們可以結合鈣離子從而顯示一個光譜響應。鈣成像技術在神經科學研究中的應用。

鈣成像是一種用于觀察和研究細胞內鈣離子濃度變化的技術。鈣離子在細胞內起著重要的調節(jié)作用，參與細胞信號傳導、細胞凋亡、細胞分化等生物過程。鈣成像技術通過使用熒光探針或基因工程技術將熒光蛋白與鈣離子結合，使其能夠發(fā)出熒光信號。當細胞內鈣離子濃度發(fā)生變化時，熒光信號的強度也會相應改變，從而可以通過顯微鏡觀察到鈣離子的動態(tài)變化。鈣成像技術廣泛應用于神經科學、細胞生物學、藥理學等領域，有助于揭示鈣離子在生物過程中的作用機制。鈣成像數據采集盒擁有 2TB 存儲空間，可選擇以太網或 Wi? 方式連接電腦。江蘇熒光顯微鈣成像代理

通過鈣成像技術發(fā)現當神經元活動的時候，胞內鈣離子濃度能上升 10 - 100 倍。超微顯微鈣成像nVista3.0

隨著功能光學成像技術的發(fā)展，神經學家們已經可以研究腦區(qū)和神經元內部的工作情況。功能鈣成像技術就是其中之一，其主要原理是將外源性熒光信號和生理現象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細胞內游離鈣離子濃度，以此表示細胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應用于實時監(jiān)測一群相關神經元內鈣離子的變化，從而判斷其功能活動。該技術的出現使得科學家可以親眼目睹神經信號在神經網絡之中時間和空間上的傳遞穿梭。功能光學成像技術的發(fā)展使研究腦區(qū)和神經元的內部工作成為可能。超微顯微鈣成像nVista3.0