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10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫(kù)構(gòu)建的每張載玻片上有四個(gè)捕獲區(qū)域,每個(gè)捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個(gè)被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcoded spots),每個(gè)點(diǎn)的直徑為55 μm,點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100 μm,并且每個(gè)點(diǎn)都有一個(gè)barcode序列。組織切片的細(xì)胞中會(huì)釋放出mRNA,遷移到每個(gè)spot的mRNA會(huì)被標(biāo)記上相應(yīng)的barcode序列,然后進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建并進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,以確定哪些數(shù)據(jù)來(lái)自哪個(gè)位置,從而實(shí)現(xiàn)空間基因表達(dá)的可視化。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),致力通過(guò)高效的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。本次培訓(xùn)班旨在跟廣大科研工作者介紹空間轉(zhuǎn)錄組的研究熱點(diǎn)和方案設(shè)計(jì)。山東宣傳空間轉(zhuǎn)錄組
10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)現(xiàn)原理是什么?10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫(kù)構(gòu)建的每張載玻片上有四個(gè)捕獲區(qū)域,每個(gè)捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個(gè)被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcoded spots),每個(gè)點(diǎn)的直徑為55 μm,點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100 μm,并且每個(gè)點(diǎn)都有一個(gè)barcode序列。組織切片的細(xì)胞中會(huì)釋放出mRNA,遷移到每個(gè)spot的mRNA會(huì)被標(biāo)記上相應(yīng)的barcode序列,然后進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建并進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,以確定哪些數(shù)據(jù)來(lái)自哪個(gè)位置,從而實(shí)現(xiàn)空間基因表達(dá)的可視化。 甘肅歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組多少錢(qián)除了皮膚、胰腺和骨頭組織外,其余樣本類(lèi)型均可開(kāi)展10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組研究。
Visium空間轉(zhuǎn)錄組能夠做何種組織類(lèi)型以及推薦切片厚度是什么?10X Genomics測(cè)試過(guò)很多組織類(lèi)型,絕大多數(shù)都可以用于空間轉(zhuǎn)錄組的分析。下圖是他們官網(wǎng)上測(cè)試過(guò)的組織類(lèi)型的列表,測(cè)試過(guò)的組織都可以運(yùn)用在空間轉(zhuǎn)錄組的分析上面。但建議用戶(hù)用基因表達(dá)玻片做正式實(shí)驗(yàn)前,務(wù)必用組織優(yōu)化的玻片測(cè)試一下,看組織能否用于空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn),同時(shí)也找到比較好的組織通透時(shí)間。切片厚度基本上以10μm為主,但也有少量組織例外。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),致力通過(guò)質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。
轉(zhuǎn)錄本的空間位置信息可以通過(guò)在原位陣列上捕獲的組織切片中的轉(zhuǎn)錄本來(lái)獲取,目前已有多種技術(shù)策略被開(kāi)發(fā)報(bào)道, 如空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)(Spatial Transcriptomics,ST)和 Visium 技術(shù),通過(guò)將包含空間位置信息的條形碼、UMI 標(biāo)簽、poly-dT 的探針固定在商用微陣列載玻片上,來(lái)捕獲包含 poly(A) 尾巴的轉(zhuǎn)錄本,并獲取全轉(zhuǎn)錄組水平的基因表達(dá)及位置信息。一些無(wú)需成像即可計(jì)算重建空間基因表達(dá)模式所需信息的技術(shù)也被開(kāi)發(fā)了出來(lái),其中之一就是是 DNA 顯微技術(shù),它記錄 cDNA 之間的接近度,該信息可用于重建轉(zhuǎn)錄本之間的相對(duì)位置??臻g轉(zhuǎn)錄組這對(duì)于發(fā)育生物學(xué)等眾多領(lǐng)域的研究都具有重要的意義。
1. 10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫(kù)構(gòu)建的每張載玻片上有四個(gè)捕獲區(qū)域,每個(gè)捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個(gè)被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcoded spots),每個(gè)點(diǎn)的直徑為55 μm,點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100 μm,并且每個(gè)點(diǎn)都有一個(gè)barcode序列。10X Visium空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)主要分為兩部分:組織學(xué)板塊和組學(xué)板塊。組織學(xué)板塊包括樣品的包埋、切片、固定、染色及成像,記錄切片的形態(tài)學(xué)信息;組學(xué)板塊包括cDNA的合成、擴(kuò)增、接頭連接和測(cè)序,記錄切片的轉(zhuǎn)錄本信息和空間位置信息 。空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析軟件開(kāi)發(fā)語(yǔ)言統(tǒng)計(jì)情況。運(yùn)用空間轉(zhuǎn)錄組使用
HE 染色適用于空間轉(zhuǎn)錄組的組織學(xué)呈現(xiàn)方法。山東宣傳空間轉(zhuǎn)錄組
早期空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的另一條發(fā)展路線是基因捕獲和增強(qiáng)子捕獲篩選,開(kāi)發(fā)于二十世紀(jì)八十年代,當(dāng)時(shí) DNA 測(cè)序通量正在增加,動(dòng)物基因組是新開(kāi)放的前沿領(lǐng)域。果蠅和小鼠的篩選是在八十年代后期進(jìn)行的,目的是觀察未靶向且通常未知的基因表達(dá)情況。隨著通量的增加,增強(qiáng)子和基因捕獲技術(shù)在九十年代成為空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的技術(shù),直到 WMISH 在九十年代后期興起。WMISH 技術(shù)的自動(dòng)化程度較高,避免了對(duì)轉(zhuǎn)基因品系的依賴(lài),同時(shí)由于在二十一世紀(jì)初獲得物種的參考基因組信息變得越來(lái)越便利,探針設(shè)計(jì)因此也更為方便。山東宣傳空間轉(zhuǎn)錄組
上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司是一家服務(wù)型類(lèi)企業(yè),積極探索行業(yè)發(fā)展,努力實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新。是一家私營(yíng)合伙企業(yè)企業(yè),隨著市場(chǎng)的發(fā)展和生產(chǎn)的需求,與多家企業(yè)合作研究,在原有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn),追求新型,在強(qiáng)化內(nèi)部管理,完善結(jié)構(gòu)調(diào)整的同時(shí),良好的質(zhì)量、合理的價(jià)格、完善的服務(wù),在業(yè)界受到寬泛好評(píng)。公司始終堅(jiān)持客戶(hù)需求優(yōu)先的原則,致力于提供高質(zhì)量的科研服務(wù),科研檢測(cè),學(xué)術(shù)研究,技術(shù)咨詢(xún)。歐易生物自成立以來(lái),一直堅(jiān)持走正規(guī)化、專(zhuān)業(yè)化路線,得到了廣大客戶(hù)及社會(huì)各界的普遍認(rèn)可與大力支持。