1、細(xì)胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢?胰酶的作用是什么?胰酶是一種蛋白酶,酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時(shí),細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程,這是什么原因?血清終止的原理其實(shí)是競爭抑制,就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì)。3、為什么使用了胰蛋白酶消化,細(xì)胞還是成團(tuán)的,這可能是什么原因?qū)е碌??①消化時(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過高之后才消化傳代⑤胰酶存儲(chǔ)不當(dāng),或者使用了過期胰酶EDTA是乙二胺四乙酸,一種金屬螯合劑。北京胰酶報(bào)價(jià)
(不含EDTA含酚紅)性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝背景胰酶又名胰醇素、胰液素。白色或淡黃色無定形粉末。系從各種動(dòng)物胰臟制取的混合物,主要是蛋白酶、脂酶、淀粉酶。溶于水呈微渾溶液。不溶于醇、醚。有引濕性,遇酸、堿及熱即喪失活力,水溶液遇酸、熱、重金屬或單寧酸時(shí)產(chǎn)生沉淀。為助消化藥,用于缺乏胰液的***癥。也用于皮革工業(yè)和紡織印染,主要用于酶法脫毛。將絞碎的豬胰漿經(jīng)***、提取、沉淀、脫脂、干燥、粉碎而得。簡介(不含EDTA含酚紅)為細(xì)胞培養(yǎng)基,1.不含EDTA含酚紅:含酚紅,(1:250)溶于HBSS溶液,不含鈣鎂。-20℃保存。胰(不含EDTA含酚紅)含,不含EDTA和酚紅,溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中,經(jīng)過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化,通常室溫消化2分鐘左右就消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用方法(不含EDTA含酚紅)使用說明---貼壁細(xì)胞Chemicalbook的消化:a)吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。b)加入少量胰蛋白酶消化液,蓋過細(xì)胞即可,室溫放置1-2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同,對于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長消化時(shí)間。c)顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化。 江蘇EDTA胰酶價(jià)格信息胰酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用和在消化酶中的作用?
細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑),半貼壁細(xì)胞或者對胰酶敏感的細(xì)胞,可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進(jìn)行細(xì)胞消化。由于細(xì)胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性,常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細(xì)胞貼壁不是非常緊密,也可用不含有螯合劑的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。胰酶對細(xì)胞膜上粘附蛋白的損害比較大,如果進(jìn)行細(xì)胞膜上蛋白的研究,建議選擇溫和的細(xì)胞消化試劑,盡量減少對細(xì)胞膜上蛋白的損傷。此外,由于胰酶自身也是一種蛋白,胰酶也會(huì)自己剪切自己,建議胰酶不要反復(fù)凍融,拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA)。
胰蛋白酶**點(diǎn)評胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀,易于引流排痰,加速創(chuàng)面愈合凈化,促進(jìn)肉芽**增生,而不損傷正常**,臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的**或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為、溫度為37℃時(shí),胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶**劑終止胰酶對細(xì)胞的作用。1.稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為%,用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調(diào)PH到左右)或PBS(D-hanks)液中。攪拌混勻,置于4℃內(nèi)過夜。2.用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器(微米微孔濾膜)抽濾**。3.分裝成小瓶于-20℃保存以備使用可!詞條圖冊更多圖冊參考資料1.胰蛋白酶.化學(xué)品數(shù)據(jù)庫[引用日期2017-05-26].***典**會(huì),***典2010版[M],北京:**醫(yī)*科技出版社。胰酶在PH值7.2-8.0的時(shí)候,溶液呈淡紅色。
品名:0.25%胰蛋白酶溶液,1X分類:細(xì)胞消化試劑規(guī)格:100ML用途:消化試劑,如胰蛋白酶,被用于將粘附細(xì)胞從其附著的表面或底物上分離和降解,以及將組織進(jìn)行游離,以開展原代細(xì)胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶(1:250)以及一種新型非哺乳動(dòng)物豬胰蛋白酶替代品,稱為ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液,可以快速消化,同時(shí)不損傷細(xì)胞。其非哺乳動(dòng)物配方使它適用于無血清應(yīng)用,不需要失效或?qū)γ敢种苿4嗽噭┛墒辜?xì)胞被快速分離,形成單細(xì)胞懸浮物,保持高細(xì)胞活力,并使傳代時(shí)的變異減至**小。細(xì)胞培養(yǎng)中胰酶的作用一般是分解脂肪等。山西重組胰酶常用知識(shí)
淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎?北京胰酶報(bào)價(jià)
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng),以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過程中,均會(huì)使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì),使組織或細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強(qiáng)。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解,起到增強(qiáng)消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時(shí)呈紫紅色,偏酸性時(shí)呈橘紅色,近中性時(shí)呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s緩沖液,不含EDTA,無酚紅指示劑,經(jīng)0.22μm過濾除菌。北京胰酶報(bào)價(jià)