上海基礎(chǔ)培養(yǎng)基常見問題

    以及無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設(shè)計，含有BSS、21種氨基酸、維生素等，***適于多種正常細胞和腫*細胞的培養(yǎng)，也用做懸浮細胞培養(yǎng)。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素，可在血清含量低時用，適用于克隆化培養(yǎng)。F12適用于CHO細胞，也是無血清細胞培養(yǎng)基中常用的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。DMEM/F12細胞培養(yǎng)基將DMEM和F12按照1:1比例混合，混合后營養(yǎng)成份豐富，血清使用量也減少。常作為開發(fā)無血清細胞培養(yǎng)基時的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。**普遍的做法是添加5~10%的血清，這樣才能維持細胞活力，促進細胞增殖。針對不同的動物細胞，現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化、個性化的低血清細胞培養(yǎng)基配方，營養(yǎng)成份更加豐富，血清使用量可降低至1～3%，由此可減少了血清等動物來源成份對生物制品安全性的影響。（serumfreemedium，SFM）經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后，無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本，簡化分離純化步驟，避免**污染造成的危害。MEM培養(yǎng)基含有多種必需氨基酸和維生素，適合細胞培養(yǎng)。上?；A(chǔ)培養(yǎng)基常見問題

    將蒸過的原料置于室溫下過夜，未被殺死的孢子便發(fā)芽生長，芽孢發(fā)育成營養(yǎng)細胞，再30min便可殺死。如此連續(xù)反復(fù)進行2-3次，亦可達到徹底**的目的。3、分批**的操作分批滅歇是在所用的發(fā)酵罐或其他培養(yǎng)裝置中進行的，它是在配制罐中配好培養(yǎng)基后，通過**管道輸入發(fā)酵罐等培養(yǎng)設(shè)備中，然后開始**。在進行培養(yǎng)基的間歇**之前，通常先將發(fā)酵罐等培養(yǎng)裝置的分空氣過濾器進行**，并且用空氣將分過濾器吹干。開始**時，應(yīng)先放去夾套或蛇管中的冷水，開啟排氣管閥，通過空氣管向發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基通入蒸汽進行加熱，同時，也可在夾套內(nèi)通蒸汽進行間接加熱。當(dāng)培養(yǎng)基溫度升到70℃左右時，從取樣管和放料管向罐內(nèi)通入蒸汽進一步加熱，當(dāng)溫度升至120℃，罐壓為1*105Pa（表壓）時，打開接種、補料、消泡劑、酸、堿等管道閥門進行排汽，當(dāng)然在保溫過程中，應(yīng)注意凡在培養(yǎng)基液面下的各種進口管道都應(yīng)通入蒸汽，而在液面以上的其余各管道則應(yīng)排放蒸汽，這樣才能不留死角，從而保證**徹底。保溫結(jié)束后，依次關(guān)閉各排汽、進汽閥門，待罐內(nèi)壓力低于空氣壓力后，向罐內(nèi)通入無菌空氣，在夾套或蛇管中通冷水降溫，使培養(yǎng)基的溫度降到所需的溫度，進行下一步的發(fā)酵和培養(yǎng)。上海基礎(chǔ)培養(yǎng)基常見問題F12培養(yǎng)基適用于神經(jīng)細胞和其他敏感細胞系。

    可通過在細胞培養(yǎng)基中添加一些保護劑，降低細胞-氣體和細胞-液體的表面張力，減少氣泡的形成。4.細胞培養(yǎng)基的**及儲存**方式及注意事項細胞培養(yǎng)基**的方式分為高壓**和膜過濾**，不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同，**方式也可能不同。①高壓**某些培養(yǎng)基（如MEM）可進行高壓**，這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓**后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺?？筛邏?*的培養(yǎng)基在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達到**效果及營養(yǎng)成分的**小損失，不需將**時間延長。絕大多數(shù)細胞培養(yǎng)基不適宜高壓**。因培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質(zhì)、多肽、生長因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用過濾消毒以除去**?？晒┻^濾**使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過濾**是當(dāng)前較為常用及便捷的一種方法，常采用μm孔徑的濾膜，部份采用μm孔徑。與高壓過濾方式相比，濾膜具有使用期限且價格較高，但對細胞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份破壞性較小。通常液體細胞培養(yǎng)基避免-20℃凍存。

    MEM低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。細胞培養(yǎng)過程中pH值下降產(chǎn)生的原因有很多。在細胞生長非?？鞎r，pH值通常下降得很快，此時可以通過及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、**、酵母或***污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。這時，可以通過以下幾種方法解決：1）增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度。NaHCO3含量在；2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液；3)適當(dāng)松開瓶蓋。在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液，使終濃度為10~25mM；4)在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks’鹽配制的培養(yǎng)液；5)如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用*****。酚紅在細胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑。一般情況下，可以通過酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值，但低血清或是無血清細胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗來判定pH值，建議使用pH計進行測定。酚紅通常對含血清的細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生明顯影響，也可通過純化技術(shù)去除。RPMI1640培養(yǎng)基提高了細胞的存活率和生長速率。

    所以做過強檢的**器還必須進行**效果的驗證。一些單位常常忽略了這個重要的問題。國內(nèi)市售的手提**器，往往儀器指針達到所需的溫度，但**物品的實際溫度卻未達到要求。導(dǎo)致**物品不徹底，影響實驗結(jié)果。培養(yǎng)基**不徹底，影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣**器無菌效果的驗證是一個必須引起重視的問題。（三）**時的注意事項使用高壓蒸氣**器時，首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時，排除**器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后，才可關(guān)閉排氣孔。假如**器內(nèi)仍存留有部分空氣時，剛壓力表上雖已達到了某一壓力值，但器內(nèi)之溫度仍未達到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多，剛二者相差也越大。差也越大，器內(nèi)溫度不足，**則不徹底。表蒸汽壓力與溫度的關(guān)系蒸汽壓力（kPa）密度（kg/cm2）溫度（℃）1126表高壓蒸汽**器中溫度與冷空氣排出量的關(guān)系蒸汽壓力（kPa）所達溫度。F12培養(yǎng)基常用于神經(jīng)細胞和其他敏感細胞系。河北RPMI1640培養(yǎng)基代理商

F12培養(yǎng)基提供了豐富的營養(yǎng)，支持細胞增殖。上?；A(chǔ)培養(yǎng)基常見問題

    生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻，冷卻到40-50℃后，輸送到預(yù)先已經(jīng)**過的罐內(nèi)。（四）、間歇**與連續(xù)**的比較1、歇**的***和缺點***是設(shè)備要求低，不需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作要求低，適于手動操作，適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模；適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**。缺點是培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)損失較多，**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降；需進行反復(fù)的加熱和冷卻，能耗較高；不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的**；發(fā)酵罐的利用率較低。2、連續(xù)**的***和缺點***是**溫度高，可減少培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的損失；操作條件恒定，**質(zhì)量穩(wěn)定；易于實現(xiàn)管道化和自控操作；避免了復(fù)的加熱和冷卻，提高了熱的利用率；發(fā)酵設(shè)備利用率高。缺點是對設(shè)備的要求高，需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作較麻煩；染菌的機會較多；不適合于含大量固體物料的**；對蒸汽的要求高。由此可見，無論在理論上或者在實踐上，與間歇**過程相比，連續(xù)**的***十分明顯。因此，連續(xù)**越來越多地被用培養(yǎng)基的**。上?；A(chǔ)培養(yǎng)基常見問題