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磷酸化蛋白的WB第三方檢測有哪些方法呢？50 度水浴 30min 后，用 TBST 洗 5 分鐘 ,3 次即可去除已孵育結(jié)合的抗體。許多人會建議 55 度水浴 30min。Strip solution 是用來去除已結(jié)合的抗體，但也會去除部分的蛋白，導(dǎo)致蛋白信號變?nèi)酢Ｎ冶救私?jīng)實驗發(fā)現(xiàn)水浴時有時溫度不穩(wěn)定，溫度定為 55 度時往往其溫度容易超過，導(dǎo)致較多的蛋白也被去除，故建議溫度設(shè)為 50 度 30min ，既能有效去除已結(jié)合的抗體，又比 55 度更能保護蛋白。Strip 時一定要注意： membrane 一定要完全泡在 strip solution 中（可用較硬的塑料膜封好），然后要完全浸入水中，使受熱均勻 。這一點很重要，要不然，隨后壓出來的總蛋白也好，內(nèi)標(biāo)也好就會不均一，無法進行比較。我曾將同一張membrane 用我提供的方法 strip 了 3 次，分別壓不同的抗體（因為有時候蛋白分子量很接近），效果都不錯。
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