磷酸化蛋白的WB第三方檢測在實(shí)操過程中有哪些注意事項(xiàng)？研究完某一蛋白的磷酸化情況后比較好也要研究一下該蛋白總的表達(dá)量。如壓完 phospho-p38 抗體后，我會(huì)把相同的 membrane 做 strip 后再壓 p38, 然后再 strip 一次，再壓內(nèi)標(biāo) actin 。做磷酸化蛋白 WB 時(shí)，除了目標(biāo)蛋白的 band 以外，往往會(huì)出現(xiàn)非特異性的 band. 磷酸化抗體不好的話，甚至?xí)撼龇翘禺愋缘?band, 而沒有你想要的 band, 所以壓片以后，一定要根據(jù) markers 比對一下，壓出的 band 分子量是否正確。 磷酸化蛋白 WB 時(shí) backgroud 也往往較深，所以壓片時(shí)間要適當(dāng)，不能太長或過短，太長則 backgroud 太深蓋住想要的那條 band, 時(shí)間過短則可能沒有 band 或者 band 太淺。磷酸化蛋白 WB 時(shí)，要用TBST，不能用PBST。用 TBST 洗時(shí)也要注意一下，搖床的轉(zhuǎn)速不要太快，洗的時(shí)間不要太長，孵育一抗和二抗之后分別洗 5min 3 次即可，寧愿 background 深一些，總比做不出來強(qiáng)得多 . 另外，洗的時(shí)候，比較好不要把幾張 membrane 疊在一起洗。瑞普信生物技術(shù)有限公司第三方檢測QPCR實(shí)驗(yàn)靠譜嗎？瀘州HE第三方檢測中心
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磷酸化蛋白的WB第三方檢測在實(shí)操過程中有哪些注意事項(xiàng)？細(xì)節(jié)決定成敗，在科研中更是如此。1.一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制劑，還要加入一定量的磷酸酶抑制劑，否則即使band壓出來也會(huì)很淺，結(jié)果也不可信。2.加一抗后比較好4度過夜，保證抗體有充分的結(jié)合時(shí)間。因?yàn)榱姿峄牡鞍字徽伎偟牡鞍琢康臉O少部分。二抗則室溫1小時(shí)即可。3.磷酸化抗體的好壞是一個(gè)關(guān)鍵因素，所以要選擇好的廠商。務(wù)必找專業(yè)的磷酸化抗體公司訂購。4.比較好根據(jù)廠商的protocol來操作實(shí)驗(yàn)，這是實(shí)驗(yàn)成功的保證。5.抗體的稀釋倍數(shù)也要適當(dāng)。不同廠商也會(huì)有不同要求。瀘州HE第三方檢測中心
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