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來源: 發(fā)布時間:2023-02-02

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GSDME全長蛋白在切割前是沒有活性的,N端和C端結(jié)構(gòu)域之間的分子內(nèi)相互作用調(diào)控自抑制。caspase-3可以將全長GSDME,剪切成有活性的N端(包含1-270a段的GSDME-N)和C端(GSDME-C)。如果需檢測到N端或者C端的GSDME片段,細胞通常需要誘導(dǎo)處理。在檢測GSDME全長時需注意,其表達水平因樣品類型(組織和細胞)而異,可能在部分組織和細胞株系表達,其表達水平也存在差異,因此需要對樣品處理和WB實驗進行一些優(yōu)化。建議設(shè)置陽性和陰性對照。并且組織樣本成分更復(fù)雜,在WB實驗時可能出現(xiàn)多條條帶現(xiàn)象。瑞普信靠譜第三方檢測WB,QPCR,ELISA,細胞實驗。

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“做miRNA下調(diào),QPCR檢測miRNA,表達水平無變化”如何解決呢?反義核酸是在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮功能,要阻斷miRNA的產(chǎn)生,理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能實現(xiàn),Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變,從而破壞miRNA表達,是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運用Cas9技術(shù),針對miR-21基因設(shè)計sgRNA ,通過慢病毒遞送細胞,并在RNA水平檢測到mir-21的下調(diào)表達,從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽(NPC)細胞生物學特性及其潛在機制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后,功能上也呈現(xiàn)出陽性,此外,溫醫(yī)大醫(yī)院的張老師使用Cas9敲除mir-545,研究了人環(huán)狀RNA PRKCI(circPRKCI)通過抑制miR-545顯示致性,促進人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的病理進展3。所以,CRISPR / Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認可的、且以QPCR檢測表達量完全沒有問題。陜西生化法第三方檢測公司推薦

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