酶標儀在用單波長測定吸光度時,除受到測定干擾(樣本的濁度、干擾色等)和電路干擾(包括噪音、漂移、電壓等)等因素外,受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中,由于液體表面張力的作用,液體的表面不是一個平面,而是形成一個凹面,從側(cè)面看似凹透鏡,這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響,光線在通過液體時,除正常被液體吸收一部分外,尚有部分被折射和反射(如光線通過凹透鏡那樣),影響吸光度的檢測。而酶標儀使用的又是通過光導纖維傳播的點光源,如果每次能在同一部位檢測,吸光度的重復性將得到保證,但由于機械運動等造成的誤差,不可能保證每孔都在相同部位被檢測,因此造成了孔與孔之間有一定的差異。
酶標儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值大小。隨著檢測方式的不斷發(fā)展,擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀,可檢測吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學發(fā)光(Lum)。酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長,而濾光片型酶標儀則根據(jù)選配的濾光片,只能截取特定波長進行檢測??蓮V泛應用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry),酶活、酶動力學檢測,酶聯(lián)免疫測定(ELISAs),細胞增殖與毒性分析,細胞凋亡檢測(MTT),報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等。溫育功能只是酶標儀的一個附加功能,是否具有并不能說明酶標儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣。江西性能穩(wěn)定酶標儀質(zhì)保
酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。海南雙檢測模式酶標儀樣品檢測
一般酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經(jīng)HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有比較大吸收,當pH值降為L 0時,比較大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數(shù)變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。海南雙檢測模式酶標儀樣品檢測
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