TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有比較大消光系數(shù),如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個波長,有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時,有的實驗室希望用酶標儀作微量生化測定,故酶標儀生產(chǎn)廠家對其生產(chǎn)的酶標儀擴展了紫外檢測功能,此時需要一個340 nm波長濾光片。此時,酶標儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。安徽檢測快速酶標儀樣品檢測波長100-400nm稱為紫外光,400-780nm之間的光稱為可見光,大于780nm稱為紅外光。
酶標儀基于濾光方式的不同可分為濾光片式的酶標儀和光柵式酶標儀。濾光片式酶標儀采用濾光片來進行波長的選擇,酶標儀內(nèi)置濾光片輪,可選擇試驗所需的不同波長的濾光片來進行分光,光源發(fā)出的全波譜光經(jīng)過濾光片后,大部分被過濾,只剩下濾光片本身允許的波長通過,這樣就可就通過濾光片來獲得特定的波長。濾光片輪一般包含4-6塊濾光片,通過選擇不同的濾光片可獲得不同的波長,但是獲得的波長都是固定的,受到一定的限制,不能獲得任意所需的波長,而且更換濾光片價格比較昂貴。一般波長固定的濾光片有405,450,490,630nm。
可見光和紫外光酶標儀分別采用鎢燈及氘燈作為光源。湖南檢測快速酶標儀質(zhì)保
酶標儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結構和光電比色計基本相同。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔板中的待測標本。該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應的電信號,電信號經(jīng)前置放大,對數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算,由顯示器和打印機顯示結果。微處理機還通過控制電路控制機械驅(qū)動機構X方向和Y方向的運動來移動微孔板,從而實現(xiàn)自動進樣檢測過程。
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