朗伯一比爾(Lambert - Beer)定律是分光光度法定量分析依據(jù)的基本原理。當(dāng)一束單色光(指路由一種顏色的光)通過一均勻的溶液時,一部分被吸收,一部分透過。
朗伯比爾定律:A = abc
其意義為:當(dāng)一束單色光通過一均勻溶液時,溶液對單色光的吸光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比。
A =abc 中,吸光系數(shù)a,表征吸光物質(zhì)的 靈敏度。a值越大,靈敏度越高。如果濃度的單位為物質(zhì)的量濃度(單位為:mol/L),則吸光系數(shù)a可以寫成ε ,ε稱為摩爾吸光系數(shù)。
由上式可知,當(dāng)溶液層厚度b和吸光系數(shù)a固定時,吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時,首先需要測定溶液對不同波長光的吸收情況(吸收光譜),從中確定比較大吸收波長 ,然后以此波長 的光為光源(單色光),進行吸光度A的測定,這是朗伯比爾定律用于定量分析的首要條件。
紫外可見分光光度計用來測量物質(zhì)對可見光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器。上海國產(chǎn)超微量分光光度計試用
A260:是核酸比較高吸收峰的吸收波長,比較好測量值的范圍為0.1至1.0。如果不在此范圍,稀釋或濃縮樣品,使之在此范圍內(nèi);如果吸光度小于0.05,檢查是否存 在操作因素(如移液不準確,樣品內(nèi)有懸浮物等)影響。DNA樣品的A260 吸光度值是否>0.1。(請注意,這個值跟儀器無關(guān),核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因為樣品中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常 會對光有一定吸收,其值<0.1);
A280:是蛋白比較高吸收峰的吸收波長.
A230:是碳水化合物比較高吸收峰的吸收波長:
A260/A280:是核酸純度的指示值。純度好的DNA或RNA,在pH7-8.5 下A260 / A280的比值應(yīng)該在2.0 或2.5。 純凈的樣品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。
A260/A230:純DNA和 RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小于2.0標明樣品被碳水化合物(糖類)、鹽類或有機溶劑污染,需要純化樣品。
廣東性能穩(wěn)定超微量分光光度計分光光度計是將成分復(fù)雜的光,分解為光譜線的科學(xué)儀器。
Micro Drop蛋白質(zhì)檢測功能:
Protein Bradford檢測方式:
Bradford是常用的蛋白定量檢測的方法。它通常用于濃度比較低的蛋白的濃度檢測。與其他比色法一樣,Bradford法檢測蛋白濃度時必須構(gòu)建一個標準曲線。
Bradford法是根據(jù)蛋白質(zhì)在酸性溶液中,能夠使考馬斯亮藍結(jié)合,使得染料的比較大吸收峰值變更為595nm來檢測蛋白濃度。檢測蛋白-染料復(fù)合物在595nm處的吸光值,并在750nm處做基線校正,計算得出蛋白的濃度。
常規(guī)檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1,檢測濃度范圍為0.10mg/ml到8.0mg/ml(BSA),比較好線性濃度范圍在0.01-1mg/ml。當(dāng)使用基座檢測時,推薦使用4μl樣品和200μl Bradford試劑。
微量檢測使用試劑/樣品的體積比為1:1,可以檢測蛋白濃度范圍從15ug/ml至125ug/ml。要準備足夠的樣品來做基座檢測,建議使用10μl樣品和10μlBCA試劑(使用PCR管)。
按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說明來準備標準品和和構(gòu)建標準曲線。確保在所有檢測過程中,每個樣品的處理時間及環(huán)境溫度一致。
超微量分光光度計不僅涵蓋了可見光分光光度計的功能而且也可以進行紫外分光光度計的應(yīng)用:
(二)UV-VIS常規(guī)可見-紫外檢測:
全波長超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見分光光度計一樣行使功能。如BIO-DL MicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值。**多可以同時指定檢測40個波長下的吸光值并把數(shù)據(jù)顯示在報告中。
(三)蛋白質(zhì)的直接定量(UV法):
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
用來測量待測物質(zhì)對可見光(400~760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器,稱為可見分光光度計。
Micro Drop蛋白質(zhì)檢測功能:
Protein A280檢測類型:
蛋白質(zhì)具有很強的多樣性,Protein A280功能主要用于檢測那些含有Trp,Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白,這些蛋白在280nm處吸光值較大。這個方法不需要構(gòu)建標準曲線,在檢測吸光值后,軟件會直接計算蛋白濃度。與核酸檢測一樣,Protein A280光譜圖顯示的是10mm光程下的數(shù)據(jù)。
Micro Drop在基座模式下可以比較高檢測400mg/ml的BSA而不用稀釋。軟件可以自動使用不同光程來檢測每個樣品的吸光值。
在樣品的10mm吸光值>3.0(>4.5mg/ml BSA)時可以選擇小容量檢測。
Micro Drop為一款全波長(185~910nm)超微量紫外可見分光光度計。江蘇雙檢測模式超微量分光光度計試用
分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性或定量分析。上海國產(chǎn)超微量分光光度計試用
分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū),(2)380~780nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度,所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進行校正檢定。上海國產(chǎn)超微量分光光度計試用
上海寶予德科學(xué)儀器有限公司正式組建于2013-12-19,將通過提供以移液器,吸頭,酶標儀,分光光度計等服務(wù)于于一體的組合服務(wù)。是具有一定實力的醫(yī)藥健康企業(yè)之一,主要提供移液器,吸頭,酶標儀,分光光度計等領(lǐng)域內(nèi)的產(chǎn)品或服務(wù)。同時,企業(yè)針對用戶,在移液器,吸頭,酶標儀,分光光度計等幾大領(lǐng)域,提供更多、更豐富的醫(yī)藥健康產(chǎn)品,進一步為全國更多單位和企業(yè)提供更具針對性的醫(yī)藥健康服務(wù)。公司坐落于上海市松江區(qū)新橋鎮(zhèn)莘磚公路258號40幢201室-1,業(yè)務(wù)覆蓋于全國多個省市和地區(qū)。持續(xù)多年業(yè)務(wù)創(chuàng)收,進一步為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟、社會協(xié)調(diào)發(fā)展做出了貢獻。