Endo H糖苷內(nèi)切酶H:結構、功能及其在糖生物學中的應用摘要Endo H糖苷內(nèi)切酶H(Endo H)是一種專門作用于糖鏈的內(nèi)切酶,對研究蛋白質糖基化修飾具有重要意義。本文將探討Endo H的結構特性、催化機制以及在糖生物學研究中的應用。引言蛋白質糖基化是一種普遍存在的翻譯后修飾,對蛋白質的結構、穩(wěn)定性和功能發(fā)揮著關鍵作用。Endo H是一種能夠特異性識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈的內(nèi)切酶,廣泛應用于蛋白質糖基化分析。Endo H的結構特性Endo H由菌Helix pomatia分泌,其分子量約為130 kDa。該酶具有一個催化中心,能夠識別并切割特定的糖苷鍵。Endo H的三維結構尚未完全解析,但其氨基酸序列和某些關鍵催化殘基已被確定。催化機制Endo H通過水解N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)與N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)之間的β-1,4糖苷鍵,從而釋放高甘露糖型N-連接糖鏈。該過程不涉及輔因子,表明Endo H催化機制可能依賴于其活性位點的氨基酸殘基。全長A2aR蛋白具有天然完整構象,VLP(病毒樣顆粒)固有特征可以帶來更高的免疫原性。Recombinant Cynomolgus SPARC Protein,His Tag
3C蛋白酶(3C Protease),也稱為3Cpro或3C樣蛋白酶(3CLpro),是一類在RNA病毒復制中發(fā)揮關鍵作用的酶。它們負責切割病毒的多聚蛋白前體,從而釋放出成熟的病毒蛋白,這些蛋白對于病毒的復制和組裝至關重要。3C蛋白酶在多種病毒中都有發(fā)現(xiàn),包括冠狀病毒、小RNA病毒等。結構與功能3C蛋白酶通常具有特定的酶切位點,能夠識別并切割特定的氨基酸序列。例如,小RNA病毒科的3C蛋白酶識別位點為Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro,切割位點位于谷氨酰胺(Gln)和甘氨酸(Gly)之間,稱為Q-G位點4。抗病毒藥物開發(fā)3C蛋白酶因其在病毒生命周期中的關鍵作用,成為抗病毒藥物開發(fā)的重要靶點。通過抑制3C蛋白酶的活性,可以有效阻斷病毒的復制過程。例如,SARS-CoV-2(病毒)的3CLpro是抗冠狀病毒藥物的重要靶點,西湖大學胡奇團隊等合作揭示了SARS-CoV-2 3CLpro潛在耐藥機制,為解決潛在的耐藥問題提供了重要信息3。耐藥性研究隨著3CLpro抑制劑的使用,其耐藥問題也日益受到關注。研究表明,3CLpro的某些突變可能導致病毒對抑制劑產(chǎn)生耐藥性。Nuclear Localiation Signal PeptideC5a通過與髓源性抑制細胞 (MDSCs) 膜上的受體C5aR1結合,招募MDSCs至炎癥局部,抑制CD8+ T細胞增殖與功能。
3C蛋白酶是切割小RNA病毒科非結構蛋白的關鍵酶,在病毒復制過程中發(fā)揮著重要作用。鼻病毒屬于小RNA病毒科,其中的人鼻病毒3C蛋白酶基因編碼區(qū)全長552bp,編碼的蛋白質相對分子質量約為22000Da。人鼻病毒3C蛋白酶具有高度的酶切特異性,能特異切割位于Gln-Gly之間的肽鍵,識別位點為Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro。本公司將人鼻病毒3C蛋白酶的編碼區(qū)基因,在大腸桿菌中進行重組表達,純化后獲得了高純度的重組3C蛋白酶,該蛋白酶能特異切割含有3C酶切位點的融合蛋白,具有良好的生物學活性。同時,本公司生產(chǎn)的3C蛋白酶帶有GST和MAT標簽蛋白,有利于后期將其從酶切體系中去除。產(chǎn)品性質:中文別名(Chinesesynonym):3C蛋白酶英文別名(Englishsynonym):3CProtease來源(Source):大腸桿菌表達標簽(label):GST-3CProtease-MAT純度(Purity):經(jīng)SDS-PAGE及HPLC分析,純度>95%分子量(Molecularweight):47.38kDa比活性(Specificactivity):500U/ml緩沖液組分(Buffer):50mMTris-HCl,150mMNaCl,1mMEDTA,1mMDTT,pH7.0酶活定義(UnitDefinition):在緩沖液中切割100μg被檢測的融合蛋白,反應條件為4℃16小時,切割率≥90%運輸和保存方法:干冰運輸;保存于-20℃。
RecombinantBiotinylatedHumanHBV(HLA-A*02:01)Protein,His-AviTag性能參數(shù)表達區(qū)間及表達系統(tǒng)(Source)RecombinantBiotinylatedHumanHBV(HLA-A*02:01)ProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheC-terminalItcontainsGly25-Thr305(HLA-A*02:01),Ile21-Met119(B2M)andFLLTRILTIpeptide.[Accession|A0A140T913(HLA-A*02:01)&P61769(B2M)&FLLTRILTIpeptide]分子量大?。∕olecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof50.5kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto52-62kDabasedonTris-BisPAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.純度(Purity)>95%asdeterminedby>95%asdeterminedbyHPLC制劑(Formulation)Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally8%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.重構方法(Reconstitution)Centrifugetubesbeforeopening.Reconstitutingtoaconcentrationmorethan100μg/mlisrecommended.Dissolvethelyophilizedproteinindistilledwater.α-凝血酶是研究血液凝固機制和血栓性疾病發(fā)展的主要靶點。重組α-凝血酶用于體外測定。
透明質酸酶,英文名稱Hyaluronidase,一類能夠降低體內(nèi)透明質酸活性的酶的總稱,結構上由4個相同亞基構成,每個亞基分子量接近14kDa,該酶是一種糖蛋白,包含5%的甘露糖和2.2%的葡萄糖胺。功能上該酶可隨機裂解透明質酸、軟骨素和硫酸軟骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷鍵。常與膠原酶聯(lián)合使用于降解細胞外基質,從而從組織中分離活細胞。本品來源于牛睪丸,活力值為400–1,000units/mg,合適的pH值為4.5–6.0。產(chǎn)品性質中文別名(ChineseSynonym)玻璃糖醛酸酶;玻璃酸酶英文別名(EnglishSynonym)Hyaluronoglucosaminidase;Hyaluronate4-glycanohydrolaseCAS號(CASNO.)37326-33-3來源(Source)牛睪丸分子量(MolecularWeight)~55kDa類型(Type)I-S外觀(Appearance)淡黃色至米黃色至褐色粉末常用的跨膜蛋白表達系統(tǒng)包括大腸桿菌表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)、昆蟲細胞表達系統(tǒng)和哺乳動物細胞表達系統(tǒng)等。Recombinant Mouse CD83 Protein,hFc Tag
在蛋白質工程中,PNGase F可以用于改變蛋白質的糖基化模式,以研究糖基化對蛋白質功能的影響。Recombinant Cynomolgus SPARC Protein,His Tag
膠原蛋白是哺乳動物體內(nèi)含量多的功能性蛋白[1]。膠原蛋白由3條α鏈的多肽鏈亞基組成,α鏈自身構型為左手螺旋,三條α鏈又互相纏繞成右手螺旋結構,即膠原蛋白的“膠原域”[2]。膠原蛋白的一級結構分析結果顯示,其肽鏈由(Gly-X-Y)n組成,其中X通常是脯氨酸,Y通常是羥脯氨酸[3]。按照膠原蛋白發(fā)現(xiàn)的先后順序,可將其分為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型等28種膠原蛋白[4],Ⅰ型膠原蛋白分子組成為[α1(Ⅰ)]2α2(Ⅰ),主要分布于骨骼中[5];Ⅱ型膠原蛋白由[α1(Ⅱ)]3組成,主要由軟骨細胞產(chǎn)生,因其含有大量賴氨酸殘基,因而糖基化率較高[6];Ⅲ型膠原蛋白分子組成為[α1(Ⅲ)]3,因含半胱氨酸所以肽鏈間形成二硫鍵,因此其本身就可形成細纖維,Ⅲ型膠原蛋白血管中含量較高,主要存在于肺泡間質中且分布雜亂,因而形成復雜的網(wǎng)狀結構,正是這種結構使得肺組織具有良好的柔韌性與彈性,并且可以為細胞提供充足養(yǎng)分,使得皮膚飽滿透亮[7]。Recombinant Cynomolgus SPARC Protein,His Tag