Recombinant Biotinylated Human CCL5 Protein

EndoS，即糖苷內(nèi)切酶S（Endo-S），是一種具有高度特異性的酶，它在生物化學(xué)研究中有著重要應(yīng)用，尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）的研究中。以下是EndoS的一些關(guān)鍵特點(diǎn)：1.**特異性**：EndoS能夠特異性地識(shí)別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu)，即在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間的連接處進(jìn)行切割。2.**應(yīng)用**：在制備糖鏈定點(diǎn)ADC化合物中，EndoS被用于將小分子細(xì)胞毒藥物“一步”定點(diǎn)連接到抗體糖基化位點(diǎn)，提供了一種重要的技術(shù)方法。3.**兼容性**：EndoS對(duì)多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，可以接受不同生物正交基團(tuán)、熒光基團(tuán)等衍生物作為底物，實(shí)現(xiàn)抗體糖基化修飾。4.**活性**：EndoS的活性對(duì)多肽沒有嚴(yán)格的要求，可以接受蛋白質(zhì)、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是，對(duì)于具有三、四個(gè)支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖，EndoS沒有活性。5.**產(chǎn)品形式**：EndoS通常以帶有His標(biāo)簽的形式存在，便于從反應(yīng)中去除，這在實(shí)驗(yàn)操作中提供了便利。6.**研究進(jìn)展**：EndoS在去糖基化方法研究中是一個(gè)重要的工具，特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時(shí)。

AdvanceFastPCRMasterMix(2×)與高保真DNA聚合酶之間的具體聯(lián)系主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1.**成分**：高保真DNA聚合酶是AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中的關(guān)鍵成分之一。這種酶負(fù)責(zé)在PCR過程中合成新的DNA鏈，其保真度決定了擴(kuò)增過程的準(zhǔn)確性。2.**保真度**：AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中的HieffCanace?AdvanceFastHigh-FidelityDNAPolymerase具有高保真度，這意味著在復(fù)制DNA時(shí)，它能夠更準(zhǔn)確地維持原始模板DNA的序列，減少錯(cuò)誤或突變的引入。3.**酶的活性**：該產(chǎn)品中的高保真DNA聚合酶具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性，這些活性有助于提高PCR擴(kuò)增的特異性和效率。4.**擴(kuò)增速度**：高保真DNA聚合酶在AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中提供了快速的擴(kuò)增速度，如5秒/kb，這有助于減少PCR擴(kuò)增過程中的非特異性擴(kuò)增。5.**適用性**：高保真DNA聚合酶使得AdvanceFastPCRMasterMix(2×)能夠適用于不同GC含量的基因擴(kuò)增，包括高GC和低GC區(qū)域，提高了PCR的適用性和成功率。

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是通過將ProteinA與Tn5轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行融合來構(gòu)建的。ProteinA是一種來源于金黃色葡萄球菌的蛋白質(zhì)，它具有高親和力結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG抗體的Fc片段的能力。Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種能夠識(shí)別特定DNA序列并在基因組上進(jìn)行“剪切-粘貼”或“復(fù)制-粘貼”的酶。融合ProteinA的目的是為了在實(shí)驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)對(duì)特定蛋白質(zhì)的靶向。下面是pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶融合的一般步驟：1.**基因克隆**：首先，將Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因和ProteinA的基因克隆到一個(gè)表達(dá)載體中。這通常涉及到分子克隆技術(shù)，如PCR擴(kuò)增、限制性內(nèi)切酶消化和連接酶連接。2.**融合蛋白設(shè)計(jì)**：設(shè)計(jì)一個(gè)融合蛋白，其中ProteinA的基因序列和Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因序列通過一個(gè)短的連接肽（LinkerPeptide）相連。這個(gè)連接肽通常包含幾個(gè)氨基酸殘基，以確保兩個(gè)蛋白部分在融合后仍能保持各自的構(gòu)象和功能。3.**表達(dá)載體構(gòu)建**：將融合基因插入到適合的表達(dá)載體中，這個(gè)載體應(yīng)該包含適當(dāng)?shù)膯?dòng)子、標(biāo)記基因（如抗性基因）和終止子，以確保融合蛋白在宿主細(xì)胞中得到高效表達(dá)。4.**宿主細(xì)胞表達(dá)**：將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞（如大腸桿菌）中，通過誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白。

5'DNA腺苷酰化試劑盒通過特定的酶催化反應(yīng)，將5'-磷酸化的單鏈DNA（pDNA）轉(zhuǎn)化為5'-腺苷?；疍NA（AppDNA）。以下是啟用5'-磷酸化的單鏈DNA的一般步驟：1.**準(zhǔn)備反應(yīng)體系**：-根據(jù)試劑盒說明書，準(zhǔn)備所需的反應(yīng)組分，包括5'-磷酸化的單鏈DNA、腺苷酰化酶（如Adenylase或MthRNA連接酶）、ATP和相應(yīng)的緩沖液。2.**混合組分**：-將5'-磷酸化的單鏈DNA與腺苷酰化酶、ATP和緩沖液混合在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)容器中。3.**孵育反應(yīng)**：-將混合好的反應(yīng)體系在指定的溫度（通常是65℃）下孵育一定的時(shí)間，以允許酶將ATP中的AMP部分轉(zhuǎn)移到DNA的5'端。4.**酶失活**：-反應(yīng)完成后，在85℃孵育5分鐘以失活腺苷?；福@一步是為了防止后續(xù)的去腺苷?；F(xiàn)象，確保腺苷?；嚷什幌陆?。5.**產(chǎn)物收集**：-由于轉(zhuǎn)化效率高，通常不需要進(jìn)行凝膠純化步驟?？梢酝ㄟ^乙醇沉淀等方法收集腺苷?；蟮腄NA產(chǎn)物。6.**產(chǎn)物應(yīng)用**：-收集的腺苷?；疍NA可以直接用于后續(xù)的克隆、測(cè)序、連接或其他分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。7.**注意事項(xiàng)**：-確保所有操作在無RNA酶和無DNA酶的環(huán)境中進(jìn)行，以避免污染。-使用時(shí)需注意反應(yīng)體系的準(zhǔn)確性，確保底物、酶和ATP的比例適當(dāng)。

EndoS糖苷內(nèi)切酶S（Endo-S）的特異性主要體現(xiàn)在其對(duì)糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)的識(shí)別和切割能力上。以下是Endo-S的一些關(guān)鍵特異性特點(diǎn)：1.**糖鏈識(shí)別**：Endo-S能夠特異性識(shí)別糖鏈結(jié)構(gòu)中的某些特定序列或結(jié)構(gòu)，尤其是N-連接糖鏈的殼二糖重要結(jié)構(gòu)。2.**切割位點(diǎn)**：Endo-S在糖鏈的特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，通常是在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間的β-N-糖苷鍵。3.**不影響抗原性**：Endo-S的切割位點(diǎn)選擇性高，不會(huì)破壞糖蛋白的抗原決定簇，因此在某些應(yīng)用中可以保持糖蛋白的免疫原性。4.**應(yīng)用多樣性**：Endo-S可以用于多種糖蛋白的去糖基化，包括抗體和其他具有N-連接糖鏈的蛋白質(zhì)。5.**研究和藥物開發(fā)**：在研究糖蛋白的結(jié)構(gòu)和功能時(shí)，Endo-S提供了一種工具來研究糖鏈對(duì)蛋白質(zhì)性質(zhì)的影響。此外，在藥物開發(fā)中，Endo-S用于制備糖鏈定點(diǎn)ADC化合物，通過精確控制藥物與抗體的連接點(diǎn)，提高藥物的療效和減少副作用。6.**兼容性**：Endo-S對(duì)多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，可以接受不同生物正交基團(tuán)、熒光基團(tuán)等衍生物作為底物，實(shí)現(xiàn)抗體糖基化修飾。7.**高效性**：Endo-S在催化糖鏈轉(zhuǎn)移或切割反應(yīng)中表現(xiàn)出高效性，有助于實(shí)現(xiàn)高效獲得功能修飾的糖工程抗體?？梢岳矛F(xiàn)有的計(jì)算工具，如CRISPR design tools，預(yù)測(cè)gRNA的活性和特異性，以輔助實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 。溴化乙錠溶液(EB,10mg/ml,RNase free)

牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I具有解超螺旋的活性，可以解開雙鏈閉合環(huán)狀DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)，便于后續(xù)的酶切反應(yīng)。Recombinant Biotinylated Human CCL5 Protein,His-Avi Tag

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過特殊改造的融合蛋白，由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成，具有以下主要應(yīng)用：1.**高通量測(cè)序建庫(kù)**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測(cè)序的DNA文庫(kù)，通過其轉(zhuǎn)座酶活性實(shí)現(xiàn)DNA片段化，同時(shí)加上測(cè)序接頭，簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)DNA測(cè)序建庫(kù)的多步過程。2.**CUT&Tag技術(shù)**：這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法，pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合，將轉(zhuǎn)座酶帶到目標(biāo)蛋白附近進(jìn)行DNA切割和標(biāo)簽添加，實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的高通量測(cè)序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，適用于表觀遺傳學(xué)、干細(xì)胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實(shí)驗(yàn)，這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法，通過轉(zhuǎn)座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA，然后在切割位點(diǎn)加上測(cè)序接頭，進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序分析。4.**轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)**：有研究開發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)方法，例如SHERRY方法，它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈，簡(jiǎn)化了建庫(kù)過程，適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，提高了樣本的利用率和測(cè)序速度。