Recombinant Human FGFR3 alpha (IIIc) Protein

重組Exendin-4是一種基于Exendin-4的重組蛋白，Exendin-4是一種從墨西哥蜥蜴（Gilamonster）的毒液中分離出來(lái)的39個(gè)氨基酸的多肽。它與胰高的血糖素樣肽-1（GLP-1）具有53%的序列同源性，并與相同的膜受體相互作用。重組Exendin-4在體內(nèi)增強(qiáng)依賴葡萄糖的胰島素分泌，抑制不適當(dāng)?shù)母咭雀叩难撬胤置冢p慢胃排空。它還在體外和動(dòng)物模型中促進(jìn)β細(xì)胞增殖和新生。重組Exendin-4是通過(guò)大腸桿菌表達(dá)的合成DNA序列編碼的39個(gè)氨基酸的Exendin-4。重組Exendin-4的特點(diǎn)包括：-分子量約為4.2kDa，是一個(gè)非糖基化的單一多肽鏈，包含39個(gè)氨基酸。-具有調(diào)節(jié)血糖水平、減少胰島素抵抗、降低胰高的血糖素、降低糖化血紅蛋白（HbA1c）和刺激β細(xì)胞生長(zhǎng)以促進(jìn)胰島素產(chǎn)生等多種生物活性。-通常以凍干粉的形式提供，需要在無(wú)菌條件下用無(wú)菌蒸餾水或含有0.1%BSA的水溶液復(fù)溶。-純度高于96%，通過(guò)SDS-PAGE和HPLC分析確定。-內(nèi)毒的素含量低于10EU/mg，通過(guò)LAL方法測(cè)定。在實(shí)驗(yàn)中，可以通過(guò)以下方法來(lái)優(yōu)化重組Exendin-4的熒光特性：1.選擇合適的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)。2.優(yōu)化激發(fā)和發(fā)射濾光片。3.評(píng)估熒光量子產(chǎn)率。4.調(diào)整緩沖液條件，包括pH值和離子強(qiáng)度。5.控制溫度和氧濃度。UBE2L3作為泛素化途徑中的關(guān)鍵酶，其在蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期控制等重要內(nèi)容有著作用。Recombinant Human FGFR3 alpha (IIIc) Protein,His-Avi Tag

重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP）是一種用于生物科學(xué)研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點(diǎn)和應(yīng)用：1.**高熒光強(qiáng)度**：EGFP比野生型GFP具有更強(qiáng)的熒光，這使得它在成像和檢測(cè)時(shí)更為敏感和有效。2.**改進(jìn)的折疊效率**：EGFP在生理溫度（如37℃）下的折疊效率更高，這有助于在細(xì)胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**：與野生型GFP相比，EGFP具有單一的激發(fā)峰，這簡(jiǎn)化了成像條件的設(shè)置，并提高了信號(hào)的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**：EGFP可以用于多種生物系統(tǒng)，包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。5.**多功能性**：EGFP可以作為報(bào)告基因用于基因表達(dá)分析，也可以作為融合標(biāo)簽用于蛋白質(zhì)定位和動(dòng)態(tài)研究。6.**非糖基化**：在大腸桿菌中表達(dá)的重組EGFP是非糖基化的，這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性。7.**純度高**：重組EGFP通常具有高純度，適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。8.**穩(wěn)定性**：EGFP的熒光穩(wěn)定性好，適合長(zhǎng)時(shí)間觀察和成像。9.**分子量**：重組EGFP的分子量約為26.9kDa，由239個(gè)氨基酸構(gòu)成。溴化乙錠溶液(EB,1mg/ml,RNase free)牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C的環(huán)境中，這有助于保持其活性。在這種條件下，該酶可以保存長(zhǎng)達(dá)3年。

使用PreScissionProtease進(jìn)行蛋白質(zhì)切割后，可以采用以下方法來(lái)提高產(chǎn)品的純度：1.**親和層析**：利用GST標(biāo)簽或His標(biāo)簽等進(jìn)行一步或多步親和層析，以高純度分離目的蛋白。2.**離子交換層析**：根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷特性，使用陽(yáng)離子或陰離子交換層析進(jìn)一步純化蛋白質(zhì)。3.**凝膠滲透層析**：通過(guò)分子大小的排阻，去除分子量較大或較小的雜質(zhì)。4.**反向?qū)游?*：使用反相高效液相色譜（HPLC）技術(shù)，根據(jù)蛋白質(zhì)與固定相的疏水相互作用進(jìn)行分離。5.**超濾/透析**：使用超濾膜或透析袋去除低分子量的雜質(zhì)，如鹽分、緩沖液成分或小分子蛋白質(zhì)。6.**二次親和層析**：在初次親和層析后，可以進(jìn)行二次親和層析以進(jìn)一步提高純度。7.**蛋白質(zhì)純化柱**：使用商業(yè)化的蛋白質(zhì)純化柱，如GST-Sepharose或Ni-NTA柱，進(jìn)行快速純化。8.**等電聚焦電泳**：通過(guò)等電聚焦電泳（IEF）分離具有不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)。9.**SDS-PAGE**：使用SDS-PAGE凝膠電泳分析蛋白質(zhì)的純度，并可通過(guò)凝膠切片回收相對(duì)純凈的蛋白質(zhì)條帶。10.**質(zhì)譜分析**：利用質(zhì)譜技術(shù)鑒定蛋白質(zhì)的確切質(zhì)量和序列來(lái)確保蛋白質(zhì)的純度和正確性。

在進(jìn)行IdeSProtease的分子改造時(shí)，平衡酶的活性和穩(wěn)定性是一個(gè)關(guān)鍵的挑戰(zhàn)。以下是一些策略，這些策略可以幫助研究者在提高酶穩(wěn)定性的同時(shí)保持或甚至提高其催化活性：1.**定向進(jìn)化**：使用定向進(jìn)化技術(shù)進(jìn)行多輪的突變和篩選，以獲得在所需條件下具有改進(jìn)穩(wěn)定性的酶變體，同時(shí)監(jiān)測(cè)其催化活性，確保改造后的酶保持高效催化能力。2.**結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的理性設(shè)計(jì)**：基于IdeSProtease的三維結(jié)構(gòu)信息，識(shí)別可能影響穩(wěn)定性和活性的關(guān)鍵氨基酸殘基，通過(guò)點(diǎn)突變或小肽插入來(lái)優(yōu)化這些區(qū)域。3.**計(jì)算模擬**：利用分子動(dòng)力學(xué)模擬和計(jì)算化學(xué)方法預(yù)測(cè)突變對(duì)酶穩(wěn)定性和活性的影響，以指導(dǎo)理性設(shè)計(jì)。4.**糖基化修飾**：通過(guò)糖基化可以增加酶的溶解性和穩(wěn)定性，但需注意不要干擾酶的活性位點(diǎn)或底物結(jié)合位點(diǎn)。5.**活性位點(diǎn)附近的柔性區(qū)域改造**：通過(guò)剛化柔性區(qū)域的策略提高酶的熱穩(wěn)定性，同時(shí)保持活性位點(diǎn)的柔性以維持催化活性。6.**長(zhǎng)距離相互作用分析**：研究蛋白質(zhì)內(nèi)部的長(zhǎng)距離相互作用，識(shí)別影響穩(wěn)定性和活性的遠(yuǎn)程突變，通過(guò)這些突變優(yōu)化酶的性能。7.**酶活性和穩(wěn)定性的權(quán)衡分析**：通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，分析酶活性和穩(wěn)定性之間的關(guān)系，找到比較好平衡點(diǎn)。在50 μL的反應(yīng)體系中，建議使用1.5 μL的5× PCR Enhancer（如果需要）和0.5 μL的Phusion DNA Polymerase。

酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F（PNGaseF）是一種酰胺水解酶，具有以下特點(diǎn)：1.**高效性**：PNGaseF是去除幾乎所有N-連接寡糖從糖蛋白中有效的酶法方法。它能夠在幾分鐘內(nèi)快速且無(wú)偏倚地釋放所有的N-糖鏈，適合后續(xù)的色譜或質(zhì)譜分析。2.**重組酶**：該酶是重組的酰胺酶，能夠從高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖中切割內(nèi)GlcNAc和天冬氨酸殘基之間的連接。3.**純度**：純度達(dá)到95%以上，通過(guò)SDS-PAGE和完整ESI-MS進(jìn)行確定。4.**儲(chǔ)存穩(wěn)定性**：在含有50%甘油的儲(chǔ)存緩沖液中，好的活性和穩(wěn)定性可維持長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月。5.**使用條件**：可以在原生或變性條件下使用，對(duì)于變性條件下的去糖基化，建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。6.**比活性**：具有高達(dá)100000U/mL的比活性。7.**His標(biāo)簽**：產(chǎn)品帶有His標(biāo)簽，常用于抗體及其相關(guān)蛋白的完全去糖基化。8.儲(chǔ)存條件：-25~-15℃保存，有效期1年。9.**無(wú)甘油版本**：還提供了無(wú)甘油版本的PNGaseF，這有助于在HPLC和質(zhì)譜分析中獲得結(jié)果。10.**酶活定義**：1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中，37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過(guò)95%的碳水化合物所需要的酶量。這些特點(diǎn)使得酵母重組表達(dá)的PNGaseF成為研究和分析糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)的重要工具。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit 是一種用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的試劑盒，它結(jié)合了反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增步驟。Recombinant Mouse CRTAM Protein,His Tag

泛素蛋白的C末端通常通過(guò)酰胺鍵與靶蛋白的氨基團(tuán)連接在一起，最常見(jiàn)的是與靶蛋白賴氨酸的ε氨基團(tuán)相連。Recombinant Human FGFR3 alpha (IIIc) Protein,His-Avi Tag

NLS-Cas9-EGFPNuclease在基因編輯中提高特異性的策略包括：1.**核定位信號(hào)（NLS）**：NLS有助于Cas9蛋白快速定位到細(xì)胞核，這可以減少Cas9在細(xì)胞質(zhì)中的非特異性結(jié)合，從而降低脫靶效應(yīng)。2.**瞬時(shí)表達(dá)**：由于NLS-Cas9-EGFPNuclease是作為蛋白質(zhì)直接遞送的，它在細(xì)胞內(nèi)不會(huì)經(jīng)歷長(zhǎng)時(shí)間的表達(dá)，這限制了Cas9的活性時(shí)間窗口，減少了長(zhǎng)時(shí)間存在導(dǎo)致的脫靶風(fēng)險(xiǎn)。3.**優(yōu)化gRNA設(shè)計(jì)**：精心設(shè)計(jì)的gRNA可以提高特異性，通過(guò)選擇與目標(biāo)基因特異性匹配的gRNA，可以減少Cas9在非目標(biāo)位點(diǎn)的切割。4.**使用高保真Cas9變體**：一些Cas9變體被設(shè)計(jì)為具有更高的特異性，通過(guò)突變Cas9蛋白的某些氨基酸，可以降低其在非目標(biāo)位點(diǎn)的活性。5.**熒光標(biāo)記（EGFP）**：EGFP標(biāo)簽不僅用于追蹤和分選，還可以幫助研究者通過(guò)熒光激起細(xì)胞分選（FACS）富集成功編輯的細(xì)胞，從而提高編輯特異性。6.**體外驗(yàn)證**：在實(shí)際進(jìn)行體內(nèi)基因編輯之前，可以通過(guò)體外DNA切割實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證gRNA的特異性和效率，篩選出比較好的gRNA。7.**使用PAM序列優(yōu)化**：通過(guò)選擇具有限制性PAM序列的gRNA，可以減少可能的脫靶位點(diǎn)。